Podcasts about g0 g1

Das Mantelzell-Lymphom ist ein aggressives B-NHL, das durch die Expression des Zell-zyklus-regulierenden Proteins Cyclin D1 charakterisiert ist. Diese Expression wird in den meisten Fällen durch eine chromosomale Translokation t(11;14)(q13;q32) ausgelöst. Klinisch weist das MCL mit einem medianen Überleben von nur drei bis vier Jahren eine der schlechtesten Langzeitprognosen aller Lymphomsubtypen auf. In fortgeschrittenen Stadien kommt es zu frühzeitigen Rezidiven nach der Behandlung mit konventionellen Chemotherapeutika. Es besteht daher ein dringender Bedarf an neuen, effektiveren, mo-lekular ausgerichteten Therapieformen, die zu einer Verbesserung der Prognose und der Lebensqualität der Patienten führen. In dieser Arbeit wurde hierfür das Proliferationsverhalten und die Viabilität von sechs humanen MCL-Zelllinien nach der Behandlung mit dem mTOR-Inhibitor RAD001 und dem Purin-Nukleosid-Phosphorylase-Inhibitor Forodesin in Gegenwart von 2'-Desoxyguanosin (dGuo) untersucht. Im Vordergrund stand zum einen die Charakterisierung der Wirkung von RAD001 und Forodesin+dGuo als Monosubstanzen. Zum anderen war es auch Ziel, die Antitumorwirkung zytotoxischer Kombinationen mit etablierten Substanzen der Chemotherapie, dem Proteasom-Inhibitor Bortezomib sowie dem PKCß-Inhibitor Enzastaurin bezüglich Wachstumshemmung, Zelltod und Apoptose zu untersuchen und diese Kombinationen auf antagonistische, additive oder synergistische Interaktionen hin zu analysieren. Die behandelten Zellen wurden hierzu einem Viabilitäts-Trypanblau-Test unterzogen, der hier als Screeningverfahren diente, um die Empfindlichkeit der Zellen auf unterschiedliche Dosen in Einzel- und Kombinationstherapien zu quantifizieren. Im Anschluss wurden die Resultate mit Hilfe der Zellzyklusanalyse durch Propidiumiodid-Färbung und Apoptose-Assays verifiziert und der Wirkmechanismus der Kombinationen differenziert. Als Ergebnis dieser Arbeit erzielte der mTOR-Inhibitor RAD001 als Monosubstanz bereits in subtoxischen Konzentrationen vor allem nach 48- und 72-stündiger Expositionsdauer eine antiproliferative Wirkung auf die MCL-Zelllinien. Außerdem zeigte RAD001 bei allen in dieser Arbeit untersuchten Zelllinien eine potente Inhibition des Zellzyklus, mit einer Zunahme der G0/G1- und einer Abnahme der S-Phase. Nach 48-stündiger Behandlung mit RAD001 in Kombination mit Fludarabin, Cytarabin, Bendamustin sowie Enzastaurin und Bortezomib zeigte sich bei einer Zelllinie ein Syner-gismus, die im Viabilitäts-Trypanblau-Test besonders empfindlich auf RAD001 war. Additive Effekte konnten bei vier von fünf untersuchten MCL-Zelllinien durch die Kombination von RAD001 und Bendamustin nachgewiesen werden. Bei zwei von fünf Zelllinien konnten diese Effekte auch mit Fludarabin erzielt werden. Vier von fünf MCL-Zelllinien zeigten nach 48-stündiger Behandlung bei der Kombination von RAD001 plus Cytarabin eine antagonistische Wirkung. Die Behandlung mit der Kombination von RAD001 plus Bortezomib oder Enzastaurin führte in einigen MCL-Zelllinien ebenso zu additiven Effekten. Die Kombinationen RAD001 plus Forodesine+dGuo und RAD001 plus Bortezomib wiesen in drei von fünf MCL-Zelllinien dagegen eine antagonistische Wirkung auf. Nach der Behandlung mit Forodesin unter Beigabe von dGuo konnte ebenfalls eine anti-proliferative Wirkung in allen untersuchten MCL-Zelllinien induziert werden. Die weiteren Untersuchungen mithilfe von Zellzyklus- und Apoptose-Analysen zeigten jedoch keine wesentlichen Veränderungen im Vergleich zu der jeweiligen unbehandelten Kontrolle. Ganz anders stellte sich die Zellzyklus-Analyse der T-ALL-Kontrollzelllinie Jurkat dar. Hier zeigte sich eine deutliche T-Zelllinien-spezifische Wirkung des PNP-Inhibitors Forodesin unter Zugabe von 2'-Desoxyguanosin. Die Kombination von Forodesin+dGuo und Bendamustin wies bei vier von fünf MCL-Zelllinien nach 72 Stunden Expositionszeit ebenso eine additive Wirkung auf. Ein synergistischer Effekt war nach 48 Stunden dagegen lediglich bei einer MCL-Zelllinie zu erkennen. Die Kombination von Forodesin und Fludarabin zeigte schließlich nach 72 Stunden Expositionszeit bei vier MCL-Zelllinien und der T-ALL-Zelllinie Jurkat eine antagonistische Wirkung, was letztendlich auf das Konkurrieren der Phosphorylierung von dGuo und Fludarabin zurückzuführen ist. Bei vier von fünf untersuchten MCL-Zelllinien wies die Kombination von Forodesin+dGuo und Bortezomib ebenfalls eine antagonistische Wirkung auf, da die beiden Kombinationspartner um DNA-Bindungsstellen konkurrieren. Eine additive Wirkung ließ sich am Ende auch bei drei von fünf MCL-Zelllinien mit der Kombination von Forodesin+dGuo plus Enzastaurin nachweisen. Zusammenfassend wäre somit ein Einsatz des mTOR-Inhibitors RAD001 und des Purin-Nukleosid-Phosphorylase-Hemmstoffs Forodesin in Gegenwart von 2’-Desoxyguanosin additiv zu anderen Chemotherapeutika im Rahmen der Mantelzell-Lymphom-Therapie durchaus vielversprechend. Allerdings sind bei der Entwicklung dieser und weiterer, in-novativer Kombinationen die zugrundeliegenden molekularen Mechanismen zu beachten, um mögliche antagonistische Wirkungen zu vermeiden.

Recent work has underlined the importance of animal models in discovery and characterisation of molecular mechanisms determining radiosensitivity and radioresistance. Enhanced sensitivity of LEC rats to ionizing radiation in terms of the acute radiation syndrome was investigated in the present work on the cellular level and compared to that of LE rats. To understand the molecular basis for the increased radiation sensitivity a series of studies were performed, which included the classical clonogenic survival assay, investigation of double strand break repair by means of PFGE and gH2AX evaluation, comet assay for evaluation of repair of single strand breaks and alkaline labile sites, and analysis of cell cycle progression of asynchronous fibroblast population. Survival assay, PFGE, and H2AX analysis were performed in a standardised experimental system - confluent fibroblasts, synchronized in G1 phase of cell cycle, and comet assays were performed in G0 lymphocytes. The data suggests a mild radiosensitization of LEC fibroblasts compared to LE. The results of studies using the selected model did not reflect the degree of animal sensitivity on the molecular level, since values of dose modifying factor (DMF) were much lower in fibroblasts (DMF2 = 1.32) compared to that of animal sensitivity (DMF = 2.36 for bone marrow syndrome (LD50/30) and DMF = 1.95 of intestinal death (LD50/7)). The investigation of DNA repair and cell cycle did not reveal a significant defect in the studied pathways in synchronized fibroblasts and cell cycle progression was not different from wild type cells. The presented data contradict the published LEC cellular phenotype. Of the possible candidate genes, which are located in the radiosensitivity locus, several were further analysed. Among those, Gata-2 appeared to be the most promising of the positional and functional candidates. However, no mutation in the coding sequence could be identified and mRNA expression levels were similar between control and LEC cells. The presented data suggests that radiosensitivity of LEC rats might be attributed to a mechanism specific for certain target tissue, like bone marrow, or enhanced in cell cycle stages other than G0/G1.

Background/Aim: Tumors exhibiting constitutively activated PI(3) K/Akt/mTOR signaling are hypersensitive to mTOR inhibitors such as RAD001 (everolimus) which is presently being investigated in clinical phase II trials in various tumor entities, including neuroendocrine tumors (NETs). However, no preclinical data about the effects of RAD001 on NET cells have been published. In this study, we aimed to evaluate the effects of RAD001 on BON cells, a human pancreatic NET cell line that exhibits constitutively activated PI(3) K/Akt/mTOR signaling. Methods: BON cells were treated with different concentrations of RAD001 to analyze its effect on cell growth using proliferation assays. Apoptosis was examined by Western blot analysis of caspase-3/PARP cleavage and by FACS analysis of DNA fragmentation. Results: RAD001 potently inhibited BON cell growth in a dose-dependent manner which was dependent on the serum concentration in the medium. RAD001-induced growth inhibition involved G0/G1-phase arrest as well as induction of apoptosis. Conclusion: In summary, our data demonstrate antiproliferative and apoptotic effects of RAD001 in NET cells in vitro supporting its clinical use in current phase II trials in NET patients. Copyright (c) 2007 S. Karger AG, Basel.

We present here the first evidence linking CD44 signaling to c-Jun expression and cell cycle progression in myeloid cell line models. CD44 ligation with the anti-CD44 monoclonal antibodies have been shown to induce differentiation and inhibit the proliferation of human acute myeloid leukemia (AML) cells, and c-Jun is involved in the regulation of these processes. The effects of anti-CD44 monoclonal antibody A3D8, on myeloid cells were associated with specific disruption of cell cycle events and induction of G0/G1 arrest. Induction of G0/G1 arrest was accompanied by an increase in the expression of p21, attenuation of pRb phosphorylation and associated with decreased CDK2 and CDK4 kinase activities. We observed that A3D8 treatment of AML patient blasts and HL60/U937 cells led to the downregulation of c-Jun expression at mRNA and protein level. Transient transfection studies showed the inhibition of c-jun promoter activity by A3D8, involving both AP-1 sites. Furthermore, A3D8 treatment caused a decrease in JNK protein expression and a decrease in the level of phosphorylated c-Jun. Ectopic overexpression of c-Jun in HL60 cells was able to induce proliferation and prevent the anti-proliferative effects of A3D8. Targeting of G1 regulatory proteins and the resulting induction of G1 arrest by A3D8 may provide new insights into anti-proliferative and differentiation therapy of AML.