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Ep#22 - SEWOL, Cult Awareness activist, Peter Daley Show notes http://pirate-radio-podcasts.com #FREE #MP3 #archive http://space-pirate-radio.podomatic.com https://twitter.com/PRPNetwork1 SKYPE - https://join.skype.com/NxINdeHgvD06 LIVE STREAMING - http://tunein.com/user/pirate1radio/ https://www.minds.com/PirateRadioNetwork #PRPN #MINDS #GROUP - https://www.minds.com/groups/profile/529176318323990528/activity #FACEBOOK #FANN https://www.facebook.com/groups/1625940707672680/ http://www.jmscult.com/ & http://www.peterdaley.net/ http://www.asiapundits.com/understanding-cults-in-korea-an-interview-with-peter-daley/ "That is why Hitler killed 6 million Jews in the gas chamber and rung oil from them. If you don't think that was a great thing, you have nothing to do with me or with salvation." Jeong Myeong-seok. December 13, 1998. INTRODUCTION 4:30 - Peter comes on board, "#Teach #North #Korean #refugees", #DPRK's 1969 hijacking of South Korean airliner, 11 passengers & crew STILL held in captivity https://duckduckgo.com/?q=teach+north+korean+refugees 6min - Korean & Vietnam war POWs & MIAs, ALSO still held in the DPRK 7min - #PirateLarry comes on board with a few colourful comments #Scurvydog #Inn 8min 30sec - #BlackSails, The #Parsons #Farwell, #Battlestar #Galactica, The #Walking #Dead 10min - #Acoustic #Folk #Metal #PiratasdeDios https://www.reverbnation.com/piratasdedios 11min 30sec - #Korea, the world's biggest #CULT country per capita? 13min - #Heavenly #Mother, #surveillance, #passwords, #encryption, #masterkey websites 16min - #Moonies, #messiah #complex. cult #leaders, #splinter #groups 18min - #Salvation #sect, #Evangelical #Baptist group 22min - #JMS #Unification #Church #Moonies offshoot, #Daejon, #INTERPOL 23min - Leader presently jailed, #SEX #RAPE cult, original sin. #purification 25min - Front groups, modelling, dancers, attempts to sue Peter over cult's bootleg nude video, police, prosecutors, immigration 30min - JMS ( #Jesus #Morning #Star ) #Jeong #Myeong #seok https://duckduckgo.com/?q=jms+jesus+morning+star+korean+cult 31min - "#FREE" #massages for the #UK police, #acupuncture, #KI (ancestoral) #energy, endorsements 32min - #Commander #SimonFoy, head of #homocide and serious crime, #Scotland #Yard http://www.theguardian.com/commentisfree/libertycentral/2009/apr/15/dna-database-policing 33min - #Miracle #cures come at a cost 35min - Pirate Larry on #OSHO, #Gnostics, #Mexican #cartels, Santeria, death cult goddess. Joey Coco Diaz, faith healers https://en.wikipedia.org/wiki/Santer%C3%ADa https://en.wikipedia.org/wiki/Faith_healing 37min - #MINDS.com 39min - Aaron #Snowberger, #SEWOL http://keytokorean.com/blog/in-the-news/falling-down-the-rabbit-hole-in-search-of-koreas-most-wanted-man/ http://www.newsmax.com/TheWire/raising-sewol-ferry-starts/2016/06/13/id/733598/ 43min - Mass murder suicide https://duckduckgo.com/?q=1987+33+members+cult+odaeyang+murder+suicide http://articles.latimes.com/1987-08-30/news/mn-4994_1_cult 46min - #AHAE https://duckduckgo.com/?q=ahae+korean+photographer #LOUVRE, #NewYork, #London, #LSO Michael Nyman http://www.ahaeproducts.com/shop-by-product-type/media/michael-nyman-through-the-only-window-cd.html http://www.thesundaytimes.co.uk/sto/news/uk_news/Arts/article1277681.ece 54min - Lavished #MILLIONS on cult leader while only $400 for SEWOL safety training, w/ Pirate Larry & Captain Long John Sinclair 57min - SEWOL sank because of collision with a #SUBMARINE? #Disinfo propaganda? https://duckduckgo.com/?q=sbs+sewol+murky+waters 59min - #Illuminati #blood #moon #sacrifice? http://www.godlikeproductions.com/forum1/message2531073/pg1?disclaimer=1 60min - #HEROES, #rats http://edition.cnn.com/2014/04/29/world/asia/south-korea-captain-video-stevens/index.html https://duckduckgo.com/?q=sewol+captain+drunk+underpants 1hr2min - Hiding in secret room http://www.bbc.com/news/world-asia-28438241 1hr4min - Korea's corrupt corporate culture. How bad is it? http://www.independent.co.uk/news/world/asia/south-korea-pardons-6000-criminals-including-business-tycoons-in-move-to-help-economy-10457062.html 1hr5min - #nepotism, JYP #KPOP #kingpin https://yellowslugreviews.wordpress.com/2014/04/29/jyp-forced-to-clarify-that-he-isnt-financially-in-bed-with-sewol-ferry-company-nor-a-religious-cult/ http://www.soompi.com/2014/04/30/jyp-entertainment-under-investigation-by-financial-authorities/ http://netizenbuzz.blogspot.kr/2014/06/jyp-entertainments-stock-prices-drop.html 1hr7min - World entertainment industry #SLEAZE, Korea's high suicide or #MURDER rate? 1hr9min - Former President Ryo-Myu Hyun's "suicide", bodyguard's everchanging story http://www.teamliquid.net/forum/general/94139-was-the-former-korean-president-murdered 1hr10min - Tea-totaller YB Eun's old SOJU bottles, walking cane "magically" appears after complaints & suspicions Yoo Byung-eun's death raises suspicions https://www.youtube.com/watch?v=rUNTSc-JllQ 1hr14min - YB Eun's children receive light sentences, wife granted amnesty 1hr15min - France & Phillipines refuse asylum 1hr17min - JYP's Golden contacts world "Ambassadors", #USA, #Israel http://keytokorean.com/blog/in-the-news/yoo-byeong-eons-golden-connections-may-include-jyp-entertainment-and-several-ambassadors/ 1hr19min - Cult leaders versions of #WORLDPEACE 1hr20min - Massive peace rallies, #BobDotson of #NBC #News duped? https://en.wikipedia.org/wiki/Bob_Dotson official #minders as with #DPRK, #LOVEBOMBING https://en.wikipedia.org/wiki/Love_bombing 1hr22min - Intl conference in #SYDNEY with Shinjonji & #Scientology http://www.mikerindersblog.org/scientology-pr-offensive/ 1hr25min - $500,000 reward for YB Eun, masters of disguise http://www.koreaobserver.com/top-6-unanswered-questions-about-yoos-death-22314/ Sewol-ho ferry owner hid inside closet during raid https://www.youtube.com/watch?v=pC8GzybX_iw 1hr27min - Conan O'Brien visits Korea, produces music video #FIRE with JYP https://duckduckgo.com/?q=conan+obrien+korea+jyp+fire 1hr29min - 60,000 Korean POW, US and international MIA, proposal for future show 1hr34min - Pirate Larry returns for show recap & closing comments 1hr35 - Moon Son Myung buSINess ties & dealings w/ #Bush #crime #syndicate http://educate-yourself.org/cn/sunmyongmoon6part13oct97.shtml http://foreignpolicy.com/2012/09/04/the-strange-life-of-reverend-sun-myung-moon/ https://consortiumnews.com/archive/moon1.html http://www.alternet.org/story/29054/neil_bush_meets_the_messiah/ 1hr41min - Messianic murderers, Jesus coming with a #SWORD, the Way of the #Peaceful #Warrior "If you're doing business with a religious son of a bitch, get it in writing; his word isn't worth shit, not with the good Lord telling him how to fuck you on the deal." #WS #Burroughs

Zusammenfassung 1. Das für das Proteolipid aus Methanocaldococcus jannaschii kodierende Gen atpK wurde in E. coli DH5alpha und in dem Minizell-Produzenten E. coli DK6 exprimiert. Das Genprodukt wurde durch radioaktive Markierung nachgewiesen. 2. Aus den Membranen der thermophilen, hydrogenotrophen methanogenen Archaea M. jannaschii, Methanothermobacter thermautotrophicus, Methanothermobacter marburgensis sowie aus den Membranen des mesophilen, methylotrophen methanogenen Archäons Methanosarcina mazei Gö1 wurden mit Chloroform/Methanol die Proteolipide der A1AO-ATPasen und die MtrD-Untereinheiten der Methyltetrahydromethanopterin:CoenzymM-methyl-transferase extrahiert. Die einzelnen Peptide wurden mittels N-terminaler Sequenzierung identifiziert. 3. Durch MALDI-TOF-Analyse wurde die molekulare Masse des maturen Proteolipids aus M. jannaschii zu 21316 Da und 21183 Da (Methionin-freie Form) bestimmt. Zusammen mit der Gensequenz konnte daraus gefolgert werden, daß es sich um eine triplizierte Form des bakteriellen 8-kDa Proteolipids handelt, also 3 Haarnadel-Domänen ausweist. Die ionentranslozierenden Carboxylate sind nur in Haarnadel 2 und 3 konserviert. Bei einer angenommenen Anzahl von 24 Helices im c-Oligomer bedeutet das, daß ein Ionen/ATP-Verhältnis von 2,7 für die Synthese von ATP ausreichen würde. 4. Die Proteolipide aus M. thermautotrophicus und M. marburgensis besitzen duplizierte Proteolipide. Die aktiven Carboxylat-Reste sind im Gegensatz zu den bisher bekannten duplizierten Proteolipiden der V1VO-ATPasen in beiden Haarnadeln konserviert. 5. Die archäellen A1AO-ATPasen-Operone der Pyrococcen enthalten ebenfalls Gene, die für duplizierte Proteolipide kodieren. Allerdings sind die für die Ionentranslokation essentiellen Carboxylat-Reste wie in den Proteolipiden der V-Typ-ATPasen nur in der zweiten Haarnadel vorhanden. Die Abtrennung der A1AO- und V1VO-ATPasen muß daher vor der Entwicklung der Eukaryonten erfolgt sein. 6. Sequenzanalysen haben gezeigt, daß das Proteolipid-Gen aus Methanopyrus kandleri dreizehnmal so groß wie das aus Bakterien ist. Es kodiert für ein Protein mit 13 Haarnadel-Domänen. Die Ionenbindstelle ist in jeder Haarnadel konserviert. 7. Alle heute bekannten Formen der Proteolipide der V- und F-ATPasen waren schon in den Archaea enthalten. Die Vielfalt an Proteolipid-Größen und -Formen der archäellen ATPasen läßt vermuten, daß sie ein Reservoir an Möglichkeiten darstellen, aus denen die V1VO- und F1FO-ATPasen gespeist wurden. 8. Durch Sequenzvergleich mit den Na+-translozierenden Proteolipiden der bakteriellen F1FO-ATPasen wurde auch in den Proteolipiden der A1AO-ATPasen ein Na+-Bindemotiv identifiziert. Es lautet: P/S/T-XXX-Q/E (Motiv I in Helix eins), ET/S (Motiv II in Helix zwei). 9. Aus Membranen von Sulfolobus acidocaldarius und M. jannaschii wurden durch Chloroform/Methanol Lipide extrahiert, anschließend wurde aus diesen Lipiden Liposomen hergestellt, in die die A1AO-ATPase aus M. jannaschii rekonstituiert wurde. Die Synthese von ATP konnte jedoch nicht nachgewiesen werden. 10. Die ATPase-Gene ahaE, ahaC, ahaF, ahaA, ahaB, ahaD und ahaG wurden in den Fusionsvektor pMal kloniert und in Escherichia coli exprimiert. Die Fusionsproteine wurden aus dem Zellextrakt isoliert und zur Immunisierung von Kanninchen eingesetzt. Die erhaltenen Antiseren gegen die ATPase-Untereinheiten AhaA, AhaB, AhaC und AhaE waren spezifisch und wurden für die Analysen dieser Arbeit eingesetzt. 11. Das für die gesamte A1AO-ATPase kodierende Operon ahaHIKECFABDG des methanogenen Archäons Methanosarcina mazei Gö1 wurde in den Expressionsvektor pVSBAD2 hinter den ara-Promotor kloniert. Das Konstrukt wurde pRT1 genannt. 12. Die auf pRT1 lokalisierten Gene wurden heterolog in E. coli DK8 exprimiert. Die A1AO-ATPase war in E. coli membran-assoziiert und funktionell. Die spezifische ATPase-Aktivität an Membranen von E. coli DK8 betrug 150 mU/mg Protein. 13. DCCD und der für archäelle ATPasen spezifische Inhibitor DES hemmten das Enzym. Die I50-Wert betrugen 0,5 mM/mg Protein, beziehungsweise 200 nmol/mg Protein. 14. Die Synthese von AhaA, AhaB, AhaC, AhaE, AhaH, AhaK, und zum ersten Mal auch des gesamten AhaI, konnten nachgewiesen werden. Gegen AhaF, AhaD und AhaG lagen keine funktionellen Antikörper vor.

1.Die A1-ATPase-Gene ahaE, ahaC, ahaF, ahaA, ahaB, ahaD und ahaG wurden in den Fusionsvektor pMal-c2 kloniert und in Escherichia coli exprimiert.Die Fusionsproteine wurden aus dem Zellextrakt isoliert und zur Immunisierung von Kaninchen eingesetzt.Die spezifischen Antiseren gegen die A1-ATPase- Untereinheiten AhaA,AhaB,AhaC,AhaE und AhaF wurden für die Studien dieser Arbeit eingesetzt. 2.Die für die hydrophile Domäne der A1-ATPase kodierenden Gene ahaE, ahaC, ahaF, ahaA, ahaB, ahaD und ahaG des methanogenen Archäons Methanosarcina mazei Gö1 wurden in den Überexpressionsvektor pGEM-4Z hinter die lac und T7-Promotoren kloniert.Dieses Konstrukt wurde pTL2 genannt.pTL2 enthält zusätzlich 162 Bp stromaufwärts von ahaE 3.Die auf pTL2 lokalisierten Gene wurden heterolog in E. coli DK8 exprimiert und die A1-ATPase funktionell synthetisiert.Die spezifische ATPase-Aktivität im zellfreien Extrakt von E. coli DK8 (pSÖ1)betrug 186 mU/mg Protein.Die Synthese der A1-ATPase-Untereinheiten AhaA,AhaB,AhaC und AhaF konnte nachgewiesen werden.AhaE und AhaG konnten nicht detektiert werden. 4.Die A1-ATPase wurde aus dem Zellextrakt von E. coli DK8 (pTL2)über Ultra- zentrifugation,Ammoniumsulfatfällung,Gelfiltration an BioPrep SE 1000/17, Ionenaustauschchromatographie an BioScale DEAE und einer zweiten Gelfiltration an Sephacryl S-300 HR bis zur apparenten Homogenität gereinigt. 5.Das gereinigte Enzym wies eine molekulare Masse von 355 kDa auf und setzte sich aus 5 verschiedenen Untereinheiten zusammen.Die einzelnen Untereinheiten AhaA (65 kDa),AhaB (55 kDa),AhaC (41 kDa),AhaD (28 kDa)und AhaF (9 kDa)wurden mittels N-terminaler Sequenzierung identifiziert und wiesen im ATPase-Komplex eine Stöchiometrie von A3B3CDF auf.AhaE und AhaG waren nicht im Komplex enthalten. 6.Der ATPase-Testpuffer wurde für die heterolog exprimierte A1-ATPase optimiert (50 mM MES-HCl,40 mM Na-Acetat,30 mM NaHSO3,8 mM MgSO4,4 mM ATP,pH 5,2).Na-Acetat und Sulfit stimulieren die A1-A7.Die gereinigte A1-ATPase aus M. mazei Gö1 hydrolysierte Mg-ATP (im Verhältnis 2:1)als bevorzugtes Substrat mit einem V von 13 ± 3 U/mg Protein und einem K von 1,3 ± 0,3 mM für ATP. 8.DES,Hexestrol und Dienestrol wurden als spezifische Inhibitoren der archäellen A1-ATPase identifiziert.Die I Werte dieser Hemmstoffe betrugen 5 µmol Hexestrol/mg Protein,3 µmol DES/mg Protein und 6 µmol Dienestrol/mg Protein. 9.Quervernetzungsexperimente konnten belegen,dass die Kopien der Untereinheit AhaA in direkter Nachbarschaft zueinander stehen.Dies trifft auch für die Kopien der Untereinheit AhaB und für die Untereinheiten AhaA und AhaB untereinander zu.Zudem konnte eine direkte Nachbarschaft der Untereinheiten AhaA und AhaD festgestellt werden. 10.Die A1-ATPase besitzt eine dreifache Achsensymmetrie.Der Kopfteil der A1-ATPase ist hexagonal geformt und setzt sich aus sechs peripheren und einer zentralen Masse zusammen. 11.Die über Röntgenkleinwinkelstreuung ermittelten Dimensionen der A1-ATPase sind:Gesamtlänge =17,8 nm,Länge Kopfteil =9,4 nm,Stiellänge =8,4 nm, Stieldurchmesser =6 nm,Kopfdurchmesser (variabel,abhängig vom Substrat)= 10,06 nm,Kopfradius (variabel,abhängig vom Substrat)=5,03 nm. TPase,wohingegen sich alkoholische Lösungsmittel die ATPase-Aktivität hemmten.