Podcasts about rho kinase

Link to bioRxiv paper: http://biorxiv.org/cgi/content/short/2023.04.12.536514v1?rss=1 Authors: Awatade, N. T., Reid, A. T., Nichol, K. S., Budden, K. F., Veerati, P. C., Pathinayake, P. S., Grainge, C. L., Hansbro, P. M., Wark, P. A. Abstract: Introduction: Primary air liquid interface (ALI) cultures of bronchial epithelial cells are used extensively to model airway responses. A recent advance is the development of conditional reprogramming that enhances proliferative capability. Several different media and protocols are utilized, yet even subtle differences may influence cellular responses. We compared the morphology and functional responses, including innate immune responses to rhinovirus infection in conditionally reprogrammed primary bronchial epithelial cells (pBECs) differentiated using two commonly used culture media. Methods: pBECs from healthy participants (n = 5) were CR using gamma-irradiated 3T3 fibroblasts and Rho Kinase inhibitor. CRpBECs were differentiated at ALI in either PneumaCultTM (PN-ALI) or Bronchial Epithelial Growth Medium (BEGM)-based differentiation media (BEBM:DMEM, 50:50, LonzaTM) - (AB-ALI) for 28 days. Transepithelial electrical resistance (TEER), immunofluorescence, histology, cilia activity, ion channel function, and expression of cell markers were analyzed. Viral load was assessed by RT-qPCR and anti-viral factors quantified by Legendplex following Rhinovirus-A1b (RVA1b) infection. Results: CRpBECs differentiated in PneumaCultTM were smaller and had a lower TEER and cilia beat frequency (CBF) compared to BEGM media. PneumaCultTM media cultures exhibited significantly increased FOXJ1 expression, more ciliated cells with a larger active area, increased intracellular mucins, and increased calcium-activated chloride channel current. However, there were no significant changes in viral RNA or host antiviral responses. Conclusion: There are distinct structural and functional differences in CRpBECs cultured in the two commonly used ALI differentiation media. Such factors need to be taken into consideration when designing and comparing CRpBECs ALI experiments. Copy rights belong to original authors. Visit the link for more info Podcast created by Paper Player, LLC

Glaucoma is a common eye condition and a major cause of blindness. There are several Cochrane reviews of ways to treat it and these were added to in June 2022 with a new review of a class of drugs called rho kinase inhibitors. We asked lead author, Josefine Freiberg from the University of Copenhagen in Denmark to tell us about the evidence in this podcast.

Glaucoma is a common eye condition and a major cause of blindness. There are several Cochrane reviews of ways to treat it and these were added to in June 2022 with a new review of a class of drugs called rho kinase inhibitors. We asked lead author, Josefine Freiberg from the University of Copenhagen in Denmark to tell us about the evidence in this podcast.

Module 2 Jake and Hunt talk about the difference between On-Off Bipolar Cells, Muscle Spindle Tension, Golgi, and the activity of Rho Kinase in Phasic-Tonic smooth muscle contractions.

Angelo P. Tanna, MD shares the biggest challenges ophthalmologists face when treating glaucoma and ocular hypertension. He discusses his recently published review of Rho Kinase Inhibitors as a novel treatment for Glaucoma and Ocular Hypertension.

The goal of the late Dave Epstein was to find a drug that treats the cause of glaucoma by improving trabecular meshwork outflow. After many years of research, Aerie Pharmaceuticals was formed and refined a Rho Kinase inhibitor called Netarsudil. In April 2018 this came to market as Rhopressa and March 2019, combined with latanoprost, as Roclatan. Today I’m talking with Rick Lewis, a glaucoma colleague based in Sacramento and Chief Medical Officer for Aerie Pharmaceuticals…and we’re Talking About Glaucoma.Talking About Glaucoma is a podcast of indeterminate frequency and duration. It’s available for free on Apple Podcasts, Google Podcasts, PocketCasts, and many other podcast services. Please rate the podcast on Apple Podcasts and tell your friends about it, so that it can reach more listeners. Drop me a line at podcast@iguy.org with your show ideas.—————————————————————————Selected links:https://aeriepharma.com/https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02246764—————————————————————————Production information:This episode was recorded March 2019 during the Annual Meeting of the American Glaucoma Society in San Francisco using two Shure SM58 microphones with a Marantz PMD661 digital recorder. Mixing and sound levelling were completed June 2019 on an iMac using Hindenberg Journalist Pro software. Narration was overdubbed using a Blue Yeti Microphone.Opinions expressed in this podcast are those of the speakers and are not intended to be taken as the standard of care for glaucoma treatment. Please always weigh the complete clinical picture and involve patients with any decisions in their care.Robert M Schertzer, MD, MEd, FRCSCpodcast@iguy.orgTwitter - http://twitter.com/robschertzeror http://iguy.tv/twitterBlog - http://wholelottarob.comor http://iguy.tv/blogFacebook - http://facebook.com/talkingaboutglaucomaOffice website - http://westcoastglaucoma.comor http://iguy.tv/officeTheme music “Middle East Gold” ©Daniel Schertzer 2010 and published by Les Prods DOSWA Enr© 2019 DOSWA Prods Enr/Robert M Schertzer MD. MEd, FRCSC—————————————————————————Today’s guest:Richard A. Lewis, MDSacramento Eye Consultants1515 River Park Drive, Suite 100, Sacramento, CA 95815Tel: 1-916-649-1515rlewiseyemd@yahoo.comhttps://www.sacramentoeyeconsultants.com/sacramento/our-doctors/richard-a-lewis-md.htm—————————————————————————

The goal of the late Dave Epstein was to find a drug that treats the cause of glaucoma by improving trabecular meshwork outflow. After many years of research, Aerie Pharmaceuticals was formed and refined a Rho Kinase inhibitor called Netarsudil. In April 2018 this came to market as Rhopressa and March 2019, combined with latanoprost, as Roclatan. Today I'm talking with Rick Lewis, a glaucoma colleague based in Sacramento and Chief Medical Officer for Aerie Pharmaceuticals…and we're Talking About Glaucoma.Talking About Glaucoma is a podcast of indeterminate frequency and duration. It's available for free on Apple Podcasts, Google Podcasts, PocketCasts, and many other podcast services. Please rate the podcast on Apple Podcasts and tell your friends about it, so that it can reach more listeners. Drop me a line at podcast@iguy.org with your show ideas.—————————————————————————Selected links:https://aeriepharma.com/https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02246764—————————————————————————Production information:This episode was recorded March 2019 during the Annual Meeting of the American Glaucoma Society in San Francisco using two Shure SM58 microphones with a Marantz PMD661 digital recorder. Mixing and sound levelling were completed June 2019 on an iMac using Hindenberg Journalist Pro software. Narration was overdubbed using a Blue Yeti Microphone.Opinions expressed in this podcast are those of the speakers and are not intended to be taken as the standard of care for glaucoma treatment. Please always weigh the complete clinical picture and involve patients with any decisions in their care.Robert M Schertzer, MD, MEd, FRCSCpodcast@iguy.orgTwitter - http://twitter.com/robschertzeror http://iguy.tv/twitterBlog - http://wholelottarob.comor http://iguy.tv/blogFacebook - http://facebook.com/talkingaboutglaucomaOffice website - http://westcoastglaucoma.comor http://iguy.tv/officeTheme music “Middle East Gold” ©Daniel Schertzer 2010 and published by Les Prods DOSWA Enr© 2019 DOSWA Prods Enr/Robert M Schertzer MD. MEd, FRCSC—————————————————————————Today's guest:Richard A. Lewis, MDSacramento Eye Consultants1515 River Park Drive, Suite 100, Sacramento, CA 95815Tel: 1-916-649-1515rlewiseyemd@yahoo.comhttps://www.sacramentoeyeconsultants.com/sacramento/our-doctors/richard-a-lewis-md.htm—————————————————————————

Das multiple Myelom ist eine Erkrankung, bei der terminal differenzierte Plasmazellen das Knochenmark infiltrieren, wodurch das typische klinische Bild eines Myelompatienten zustande kommt. In den letzten Jahren haben sich die Hinweise gehäuft, dass die Bindung der Myelomzellen im Knochenmark an Stromazellen die Chemosensitivität der Myelomzellen vermindert und somit zur „de-novo drug resistance" beiträgt. Das primäre Ziel dieser Arbeit war es, ein Zellmodell zu entwerfen, mit welchem die Untersuchung der Interaktionen von Stromazelle und Myelomzelle und damit der zelladhäsionsabhängigen Zytostatikaresistenz (CAM-DR) möglich ist. Darüber hinaus sollte diese Zytostatikaresistenz charakterisiert und mögliche molekulare Therapietargets identifiziert werden, welche eine Verhinderung von CAM-DR ermöglichen. Da das etablierte Kokulturmodell auf einer Kultur mit der Stromazelllinie HS-5 beruhte, wurde diese zuerst bezüglich der Oberflächenmarker und des Apoptoseverhaltens charakterisiert. Es wurde gezeigt, dass sich primäre Stromazellen aus Knochenmarksspiraten und die Stromazelllinie HS-5 zwar in ihrer Chemosensibilität unterscheiden, sie prinzipiell jedoch gleich reagieren. Beide lösen bei einer direkten Kokultur mit Myelomzellen im selben Maße CAMDR in den Myelomzellen aus. Die anschließende Charakterisierung von CAM-DR bewies, dass CAM-DR nicht zelllinienspezifisch und nicht zytostatikaspezifisch ist. HS-5-Zellen verhinderten nicht nur die Entstehung von später sondern auch von früher Apoptose. Es zeigte sich, dass das Ausmaß von CAM-DR maßgeblich von der Dauer der Kokultivierung abhängt. Des Weiteren stellte sich heraus, dass in diesem Zellmodell die von den HS-5-Zellen sezernierten Zytokine keinen Einfluss auf die Apoptoseinduktion hatten. Konsequenterweise wurden die Oberflächenantigene auf den Myelomzellen und den Stromazellen quantifiziert und teilweise deren Alteration nach einer Inkubation mit Zytostatika festgestellt. Sowohl eine Blockade der wichtigsten Integrine VLA-4 und LFA-1 als die Modulation der wichtigsten Signalwege konnte CAM-DR zwar teilweise, aber nicht vollkommen verhindern. Allein Vertreter der Statine, Simvastatin und Lovastatin, konnten CAM-DR drastisch reduzieren. Wie weiterhin gezeigt werden konnte, lag dies nicht an einer verminderten Expression von Oberflächenintegrinen, einer verminderten Zytokinsekretion der Stromazellen oder einer verstärkten Deadhäsion der Myelomzellen von den Stromazellen, sondern an der Hemmung der Geranylgeraniolpyrophosphatsynthese. Wir wiesen nach, daß Statine in der Kokultur über die Hemmung des HMG-CoA-Reduktase/GG-PP/Rho/Rho-kinase-Signalwegs wirken. Dies wurde in weiteren Experimenten, in denen selektiv die Geranylgeranioltransferase mittels GGTI-298 und die Rho-Kinase mit Y-27632 gehemmt wurden, bestätigt. Die Ergebnisse der vorliegenden Arbeit können als Grundlage für einen potentiellen Einsatz von Statinen in der Therapie des multiplen Myeloms dienen, denn bezüglich des dargestellten Signalwegs wirken die Statine bereits im subtoxischen Bereich. Die weitere Erforschung von CAM-DR und deren assoziierte Signalwege bei anderen Tumorentitäten sowie die Evaluation der klinischen Relevanz der Gabe von Statinen zur Blockade von CAM-DR ergeben sich als wichtige nächste Schritte als Konsequenz der vorliegenden Arbeit.

Bakterielle Toxine aktivieren spezifische Signalwege in humanen Zellen und modulieren so deren Funktion und Morpholgie. Ein besseres Verständnis der Effekte von Toxinen auf humane Zellen könnte zur Aufklärung der Pathogenese bakterieller Erkrankungen beitragen. In dieser Arbeit wurde der Effekt des Exotoxins CNF-1 aus Escherichia coli auf die Morphologie humaner Endothelzellen (HUVEC) und die beteiligten Signalwege untersucht. CNF-1 führt in HUVEC zeitabhängig sowohl zur Bildung von Aktinfasern als auch zur Ausbildung von "membrane ruffles" und Filopodien. Diese Aktinstrukturen werden durch Aktivierung der GTPasen Rho, Rac und CDC42 induziert. Rho führt in Endothelzellen über Rho-Kinase zu einer Myosinleichtketten (MLC)- Phosphorylierung und dadurch zur Hemmung von MLC-Phosphatase. Stimulation der Endothelzellen mit CNF-1 führt hingegen abhängig von Rho und Rho-Kinase ohne Hemmung der MLC-Phosphataseaktivität zu einem Anstieg der MLC-Phosphorylierung und einer Zellkontraktion. Es konnte gezeigt werden, dass zwar Rac und CDC42 in den ersten Stunden durch CNF aktiviert werden, diese aber nicht für die MLC-Phosphorylierung verantwortlich sind. 24h nach CNF-Stimulation zeigt sich immer noch eine Aktivierung von RhoA, nicht aber von CDC42 und Rac. Trotzdem kommt es zu einem Anstieg der MLC-Phosphatase und dadurch zu einem Abfall der MLC-Phosphorylierung und Zellausbreitung. Diese Ergebnisse zeigen, dass CNF zu einer Entkopplung des Rho, Rho-Kinase, Myosinleichtketten-Phosphatase-Signalweges führt. Diese Entkopplung könnte eine Rolle bei der pathologischen Wirkung des Toxins spielen.

Oxidiertes “Low density Lipoprotein“ (LDL) trägt durch Aktivierung von vaskulären End othelzellen und Thrombozyten zum Fortschreiten der Atherosklerose bei. Da die durch milde oxidiertes LDL (mox-LDL) aktivierten Signalwege in Endothelzellen und Thrombozyten bisher nur unzureichend charakterisiert waren, wurden sie in dieser Arbeit näher untersucht. Weiterhin wurde ausgehend von der Beobachtung, daß es bei milder Oxidation von LDL zur Bildung von Lysophosphatidsäure (LPA) kommt, und daß LPA die spezifische Thrombozyten- aktivierende Substanz im milde oxidierten LDL ist, in dieser Arbeit in in vitro Modellen untersucht, ob LPA und das strukturell und funktionell verwandte Lysophospholipid Sphingosin- 1-Phosphat (S1P) Signalwege regulieren, die zur pathologischen Aktivierung von Thrombozyten und Endothelzellen beitragen. Als Modellsysteme wurden unter anderem die endotheliale Permeabilität und der Plättchen-“shape change“ herangezogen. Es konnte gezeigt werden, daß milde oxidiertes LDL und LPA sowohl in Endothelzellen als auch in Thrombozyten - über Membran-gebundene LPA-Rezeptoren - die GTPase Rho und deren Effektor- Molekül Rho-Kinase aktivieren. Rho-Kinase hemmt die Myosin Leichtketten Phosphatase, wodurch es zum Anstieg der Myosin Leichtketten Phosphorylierung kommt. Myosin Leichtketten Phosphorylierung führt (i) zur Kontraktion von Endothelzellen, die wiederum einen Anstieg der endothelialen Permeabilität auslöst, und (ii) zur Formveränderung (shape change) von Thrombozyten, dem ersten Anzeichen der Plättchen-Aktivierung. Das Lysophospholipid S1P dagegen induziert in Endothelzellen sequentiell (1) Rho/Rho-Kinase abhängige Myosin Leichtketten Phosphatase-Inaktivierung, Myosin Leichtketten Phosphorylierung und Endothelzellkontraktion, (2) Rac abhängige Myosin Leichtketten Phosphatase-Aktivierung, Ausbildung von “membrane ruffles“ und Endothelzellausbreitung und (3) erneute Rho/Rho- Kinase abhängige Myosin Leichtketten Phosphatase-Inaktivierung und Endothelzellkontraktion. Das durch S1P regulierte Wechselspiel zwischen Rho- und Rac-Aktivität und die dadurch regulierten Sequenzen von Zellkontraktion und -ausbreitung sind wahrscheinlich für die Endothelzellmigration im Rahmen von Angiogenese und Wundreparatur von Bedeutung. Den Lysophospholipiden könnte also eine wichtige Rolle in der Pathogenese der Atherosklerose und in der Regulation von Angiogenese und Wundreparatur zukommen. Die pharmakologische Hemmung des Rho/Rho-Kinase Signalweges könnte möglicherweise einen neuen Ansatzpunkt zur Behandlung der Atherosklerose darstellen.

Ziel der Arbeit war es, die molekularen Mechanismen zu erforschen, durch die das Pasteurella multocida Toxin zu einer Aktivierung von Endothelzellen mit anschließender Störung der Barrierefunktion des Endothels führt. Dafür wurden humane Endothelzellen (HUVEC) verwendet, die für Permeabilitätsmessungen auf Porenmembranen bis zur Entstehung eines dichten Monolayers kultiviert wurden. Als Maß für die endotheliale Permeabilität wurde die Durchlässigkeit des endothelialen Monolayers für Meerrettichperoxidase verwendet. Zur Sichtbarmachung des endothelialen Zytoskeletts wurden die Zellen mit Rhodamin Phalloidin gefärbt und im Fluoreszenzmikroskop analysiert. Mit Hilfe spezifischer Hemmstoffe, die teilweise in die Zellen mikroinjiziert wurden, sowie der biochemischen Messung von Enzymaktivitäten bzw. Phosphorylierung, erhielten wir folgenden Ergebnisse: 1. Das Pasteurella multocida Toxin führt zu einer Erhöhung der Permeabilität des endothelialen Monolayers über einen Rho-GTPase-abhängigen Signalweg. 2. Die Stimulierung der Endothelzellen mit dem Pasteurella multocida Toxin führt zur massiven Bildung von Aktinstreßfasern, die von Rho, seinem Zielprotein der Rho-Kinase als auch von der MLC-Phosphatase abhängig sind. Diese morphologischen Veränderungen stellen vermutlich die Basis für die Erhöhung der endothelialen Permeabilität dar. 3. Pasteurella mulocida Toxin führt über Rho und mit großer Wahrscheinlichkeit auch über die Rho-Kinase zu einer Inaktivierung der MLCPhosphatase mit anschließender Erhöhung der MLC-Phosphorylierung. Als Ergebnis unserer Arbeiten ergibt sich ein Signalweg, in dessen Zentrum die GTPase Rho steht und dessen Details noch einmal in der Abbildung 7-1 zusammengefaßt werden.