Podcasts about Tm3

Villanova Quarterback Tanner Maddocks is not your usual D1 athlete. Tanner is also the founder of Athlete Squared, a platform for high school athlete to watch training video of college players they look up to. Tanner is one of the players in Division 1 history we know to be raising money for his startup WHILE playing college football. Crazy, but Tanner is up to the task. We chat about how selling NFTs has helped TM3 fund his company, the vision of Athlete Squared, and balancing football, school, and the next multi-million dollar company. The views and opinions expressed in this video are solely those of the individuals featured and do not necessarily represent the views or opinions of Athletes & Assets. We do not accept liability for any advice given in this video, and viewers are encouraged to seek professional guidance before making any business decisions. Additionally, the participation of athletes in this video does not imply endorsement or sponsorship by their respective employers.

Fr. Timothy Gallagher and Kris McGregor discuss the often overlooked relationships that shaped the life and spirituality of St. Thérèse of Lisieux. Reflecting on the profound and enduring influence of Thérèse's extended family, Fr. Gallagher takes a special focus on her cousin Marie Guérin, who was both a close friend and spiritual companion to Thérèse. The post TM3 – Facing Temptations with Grace – St. Therese and Marie: A Story of Two Cousins with Fr. Timothy Gallagher – Discerning Hearts Podcast appeared first on Discerning Hearts Catholic Podcasts.

Justine and Erica from the Surreality Podcast continue to discuss the insanity that is TM3. Joey is officially off the weed and refuses to support Katie's dreams of going into student debt, Alex gets a tattoo for a kid she DOES have, Papichulo attends court, and Josh refuses to give up his lifelong dream of staying on a bucking horse for longer than 3 seconds For more Teen Mom recaps and so much more, head to patreon ! www.patreon.com/shorejustine @Shorestorepod instagram

TM3 goes OFF for 41 as the Pelicans crush the Blazers at home

TM3 goes OFF for 41 as the Pelicans crush the Blazers at home

Gagnez une tasse à l’effigie de Silence on Roule. IKEA et Electrify America installent des bornes de recharge. Tesla ferme pour le moment les commande de TM3… Lire la suite "Épisode # 132 : Le magazine Alternative Électrique"

Marcel Malczewski sempre teve muita curiosidade por grandes negócios. Incentivado pelo pai, decidiu ser engenheiro e mergulhar na área de tecnologia, que ainda engatinhava no Brasil. Na década de 1980, iniciou um projeto que mudaria a sua vida: a Bematech. Idealizada como trabalho de conclusão de curso, a empresa, que foi desenvolvida com a parceria de seu sócio, tornou-se um negócio inovador e grandioso por oferecer soluções e equipamentos de automação comercial. Ela se expandiu pelo país, e foi adquirida em 2015. Depois desse primeiro passo, Marcel não saiu mais do ramo e é hoje o CEO da TM3, gestora de investimentos especializada em tecnologia. Neste episódio do podcast “YPO Cast”, a conversa é com Marcel Malczewsk. Nele, o empresário e escritor conta a história de fundação e aquisição da Bematech, a experiência de investir em tecnologia nos anos de 1990, e fala sobre as mudanças que o mercado enfrenta. Dê um play nesse episódio e confira. Produção: Voz e conteúdo | www.vozeconteudo.com.br - @vozeconteudo

The Pelicans charge back from 23 points down against the Lakers, behind a huge third quarter from TM3 and spurred on by the return of BI on the second night of a back to back. Lyle celebrates!Advertising Inquiries: https://redcircle.com/brandsPrivacy & Opt-Out: https://redcircle.com/privacy

If you ask a CEO to give you their sales pitch, they usually start with “uh” and ramble about their product. Wrong, wrong, wrong!That and many other sales pitch mistakes can be resolved with education-based marketing.In this episode, I speak with Ted Miller III, CEO at Training Mastery 3 (TM3), about correcting the worst sales strategies with customer-centricity, audacious claims, brain science, smart recruiting, and education-based marketing.Join us as we discuss:What education-based marketing is and how it worksHow to make an audacious claim correctlyRecruiting talent based on motive and intentStrategic insight means finding new voices Check out these resources we mentioned during the podcast:Think & Grow Rich by Napoleon HillPower vs. Force by David R. HawkinsThe Business Breakthroughs Podcast Catch every single episode of The Evolved Sales Leader by subscribing on Apple Podcasts, Spotify, our website, or your favorite podcast player.

If you ask a CEO to give you their sales pitch, they usually start with “uh” and ramble about their product. Wrong, wrong, wrong! That and many other sales pitch mistakes can be resolved with education-based marketing. In this episode, I speak with Ted Miller III, CEO at Training Mastery 3 (TM3), about correcting the worst sales strategies with customer-centricity, audacious claims, brain science, smart recruiting, and education-based marketing. Join us as we discuss: What education-based marketing is and how it works How to make an audacious claim correctly Recruiting talent based on motive and intent Strategic insight means finding new voices  Check out these resources we mentioned during the podcast: Think & Grow Rich by Napoleon Hill Power vs. Force by David R. Hawkins The Business Breakthroughs Podcast  Catch every single episode of The Evolved Sales Leader by subscribing on Apple Podcasts, Spotify, our website, or your favorite podcast player.

Today, I'm speaking with Ted Miller III. Ted is a business growth expert, sales innovation strategist, coffee aficionado, and the CEO of Training Mastery 3 (TM3)—which expertly guides small businesses to reach their next level of success.  He's worked with over 25,000 entrepreneurs from 24 different countries, doubling their sales in only 12 months. Ted used the same principles internally, doubling sales 3 years in a row with his senior business partners, the late, great Chet Holmes and the amazing Tony Robbins. Ted has also worked with business titans such as Robert G. Allen, Jay Levinson, Jay Abraham, and many more.  After working with so many entrepreneurs over the years, Ted realized that their challenges weren't that unique. He heard the same problems over and over again. He decided to turn those insights into a proven system that has gone on to help thousands of business leaders skyrocket their success.   In today's episode, you'll learn the big difference between companies that get stuck and ones that breakthrough. You'll also hear actionable tactics and strategies for sourcing, screening, and onboarding a high-performing sales team. Key Takeaways: Hear Ted's rags to riches story—from sleeping in a pickup truck to partnering with Chet Holmes and doing $100M in business.  Your biggest challenges as an entrepreneur aren't that unique. If you want to grow your business, there's only 12 core principles to focus on!  How to recruit sales stars that skyrocket your business. Effective onboarding tactics to quickly determine if you hired the right salesperson.  Increasing conversions by texting your prospects.  How to develop a predictable and proven selling system with sales scripts. Why you should stop role playing with your sales team. Do this instead!  Why salespeople fail at cold calling.  Stop asking salespeople to be marketers! Subscribe to the Podcast We hope you enjoy this episode and that you find some golden nuggets within this interview. Trust us, it's there! If you want episodes delivered straight to your inbox, consider subscribing to the show and we'll email you each time a new episode is released! Thanks for tuning it & keep being awesome. BAM!

The Pelicans fall to the Rockets in Houston despite Brandon Ingram dominating. Also Jax, TM3 and Jose are off to Birmingham. Advertising Inquiries: https://redcircle.com/brandsPrivacy & Opt-Out: https://redcircle.com/privacy

FSDBeta rollout slows to ensure safetyhttps://www.teslarati.com/tesla-fsd-beta-rollout-strategy-update-elon-musk/ Hertz deal update, Hertz could order another 50k TM3 for Uber renters, Elon confirms there is no signed contact https://www.teslarati.com/tesla-model-3-hertz-150000-vehicle-order/ https://www.teslarati.com/tesla-tsla-hertz-model-3-deal-no-contract/ First pre-fab Supercharger install in Canada at New Minas, Nova Scotia https://driveteslacanada.ca/supercharger/tesla-brings-prefabricated-superchargers-to-canada/ US EV Tax credit still included in bill airing to be approved https://www.teslarati.com/tesla-12500-ev-tax-credit-biden-build-back-better/ Tesla places a 45 GWh LFP battery order with CATL https://www.teslarati.com/tesla-orders-lfp-batteries-800k-model-3-model-y-2022/ FSDBeta arrives in Canada (sort of), via PA Jeff (@JeffTutorials)https://driveteslacanada.ca/news/tesla-fsd-beta-canada-works-just-as-well-as-us/ SiR PRYCE band releases music video “Rush” with the help of SentryModehttps://youtu.be/WKHHdUpCk8o Supercharger for Non-Tesla's goes LIVE at 10 stations in the Netherlands https://www.teslarati.com/tesla-open-supercharger-pilot-program-begins-netherlands/ 4680 battery manufacturing equipment arrives at Giga Texas https://driveteslacanada.ca/news/tesla-4680-battery-cell-production-line-equipment-arrives-at-giga-texas/ New chime for Traffic-Aware Cruise Control rolls out for more safetyhttps://www.teslarati.com/tesla-autopilot-tacc-chime-update-released/

New Orleans Pelicans Beat Orlando Magic: NAW starts HOF Journey, Trey Murphy III ROTY? Also: NAW, BI, TM3, Zion, and Jonas as the core five for the next five years plus how Graham still helps the offense when his shot is not falling. --- Support this podcast: https://anchor.fm/protect-the-nest-pelicans/support

We have a very special episode of TM3 podcast to share with you. We invited our dear friend, Juli Henderson, to join us for a candid conversation on life, both the highs and the lows. She has just launched a new blog and community for parents going through life unexpected, and we hope you’ll join us in supporting her mission of supporting mothers, children, and families in every way possible. You can get started reading her blog at https://www.inourarms.blog/   Follow me on social media: Instagram: https://www.instagram.com/thetomasmartinez/ Facebook: https://www.facebook.com/thetomasmartinez/ Twitter: https://twitter.com/tomasm_3 Linkedin: https://www.linkedin.com/in/tomasmartineziii/  

On this episode of TM3Impact, we are joined by, Max Kozlovsky. Max shares the honor of being on TM3 for a second time!  Learn how adapt to the new world of change and thrive.   On May 4th, Max is hosting a Scaling Up workshop.  Learn more here. https://www.eventbrite.com/e/scaling-up-san-antonio-business-growth-workshop-tickets-138654225521 . Subscribe to my channel here: https://www.youtube.com/channel/UCf5YJgYLCxTSyatWDcKwUWw?sub_confirmation=1 Follow me on social media: Instagram: https://www.instagram.com/thetomasmartinez/ Facebook: https://www.facebook.com/thetomasmartinez/ Twitter: https://twitter.com/tomasm_3 Linkedin: https://www.linkedin.com/in/tomasmartineziii/  

(Language Warning - today's guest uses some colorful language, so if you have sensitive ears nearby please take note!) On this episode of Nemo Radio, Sales & Business Growth Strategist Ted Miller III shares his favorite strategies and systems for quickly scaling your sales and winning high-ticket deals. Ted is the CEO of Training Mastery 3 (TM3) and has been blessed to worked with over 25,000 entrepreneurs from 24 different countries to double their sales in 12 months. Ted has also partnered with the likes of Tony Robbins, Robert Allen, Chet Holmes, Jay Abraham, Infusionsoft and many others during his career.

A Stone's Throw Away The parallels in the lives of Grimsmo and Saunders are uncanny to say the least. Both get the chance to clear their heads--one on Lake Ontario and the other on Lake Erie. Full Steam Ahead During one of the most emotional weeks of his life, Saunders watches on Instagram as the UMC-750 and TM3 are delivered in his absence--and that's a beautiful thing. With a team he can rely on, he's been able to focus his attention on who needs it most: with his wife! We're happy to say Evonne's made it through surgery and on the road to recovery! #Inspired Grimsmo gives an occupational talk at a local school. By taking a hands-on approach, he's creating memorable experiences that resonate with the younger generation. PLANNING FULL SWISS Grimsmo knows exactly which part the Swiss lathe will play in shop production. In addition to tool holders, drill holders, and inserts, he plans to purchase a 60,000 rpm (not a typo) electric spindle to mill the torx pattern on the screws!  #7 TOOL UPDATE In last week's episode, Saunders suggested that Grimsmo try ramping down to solve a recurring tool problem. Did it work?  WWYD? Phil asks a thought-provoking question about whether or not to alternate between OP1 and OP2 on a 5-axis machine tool with 10 pallets. Short answer: It depends.   Higbee Threads? Tell me more! With the SAGA having threaded parts, this clearly the way to go FULL GRIMSMO!

On today's show we speak with Ted Miller of TM3 about how to recruit and retain top producing sales stars. Ted Miller III is the CEO of Training Mastery 3. He has worked with over 25,000 entrepreneurs from 24 different countries to double their sales in 12 months. He not only helped them, he used those skills internally, doubling sales 3 years in a row with his senior business partners, the late, great Chet Holmes and the amazing Tony Robbins. Learn more about your ad choices. Visit megaphone.fm/adchoices

Und auch in dieser Wocher bringen die Moderatoren von TM3 spannende Themen mit. Die drei Moderatoren Zero, Marcel und Kari haben keine Mühen gescheut und sich in der letzten Woche hingesetzt und alles Wichtige vom Unwichtigen getrennt. Diese drei Themen haben es diese Woche in die Sendung geschafft: Ein Tritt in den Hintern Ein Piano im Wald Ein verstorbener Kindheitsheld Ihr hört die aktuelle Folge Dienstag-, Donnerstag- und Sonntagabend jeweils um 22 Uhr und danach in unserem Podcastarchiv! Viel Spaß beim Zuhören

Wir sind M3, TM3. 007, in geheimer Infomission. Habt ihr eigentlich manchmal Lust auf Eis? Dann lasst eure Geschmacksknospen von denen neuen Japantrends zur Explosion bringen. Mjam, lecker und ungewöhnlich.  

TM3 zu zweit, weil Marcel krank ist. Aber das ist kein Hindernis. T3M2 oder so machen wir also. Das hindert uns aber nicht.Unter anderem geht es um musikalisches aus dem Animebereich

Die Geburtsstunde von TM3. Mit der Kari, die Zero und Gott Marcel. TM3 ist nicht aus Pokemon, nicht der Frauensender, sondern steht für 3 Themen und 3 Moderatoren. In der Pilotfolge des neuen Formats haben wir folgende Themen: Die Kazé Anime Nights locken jedes Jahr etliche Besucher ins Kino. Vier Filme inkl. Datum stehen bereits fest. Das (MMO)RPG "Monster Hunter World" versetzt nicht nur Fans der Reihe in höchste Schwärmereien. "Fullmetal Alchemist" bekommt einen Realfilm, und wir haben ihn uns bereits angeschaut.

How can you go from being miserable without getting enough New Clients, to doubling sales in just 12 months? All by using Webinars that $ell. Ted Miller, the CEO of TM3 helps business owners like you dramatically increase your sales while breaking through the obstacles that are keeping you small, that are keeping your hands in every detail of your business…that are preventing you from tapping into unrealized profits. Ted is also the co-creator of “The Fortune In You” with NY Times Best Selling Author – Robert G. Allen Or maybe you heard the radio ads from with his work with his ‘late’ friend, business partner and mentor Chet Holmes. Ted’s company also ran all of the business coaching and consulting for Tony Robbins for 4 years. Through that experience…of selling over One Hundred Million Dollars in sales, Ted became the world’s top webinar conversion strategist. He personally has hosted over 2,000 webinars and worked with over 20,000 entrepreneurs from 24 different countries. I have read his manuscript on “Webinars that $ell”…I discovered it to be brilliant and that will be our topic for today. YOUR FREE GIFT: 1. 7 Minute Breakthrough 2. A Free copy of Ted’s new book: “Webinars that $ell” Be the 1st to have access to the “Webinars that $ell” book. You’ll download the manuscript prior to it even being printed… so calling it an “Early Release” would be appropriate! Get them here: http://greatnessquest.com/tm3

Die Familie A der G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCRs) bildet die größte und vielfältigste aller Transmembranrezeptorfamilien. Ihre Mitglieder spielen eine wesentliche Rolle in fast allen (patho)physiologischen Prozessen. Nach Agonistenbindung aktivieren GPCRs, wie ihr Name andeutet, heterotrimere G-Proteine aber auch G-Protein-unabhängige Signalwege. Die verschiedenen aktiven G-Proteinuntereinheiten (Gα-GTP und βγ) induzieren nach Dissoziation vom Rezeptor entsprechende Signalkaskaden z.B. über Phospholipase A und Cβ. Um eine Fehlregulation zellulärer Prozesse z.B. durch „Überstimulation“ zu verhindern, unterliegen GPCRs strengen Regulationsmechanismen, die ihre Fähigkeit zur Signaltransduktion und ihre Verfügbarkeit an der Zelloberfläche bestimmen. Die Bradykininrezeptoren B1 und B2 (B1R, B2R) gehören zur Familie A der GPCRs, also zu den Rhodopsin-ähnlichen GPCRs, und werden durch die pro-inflammatorischen Peptide desArg9-Bradykinin/desArg10-Kallidin (DABK/DAK) bzw. Bradykinin (BK)/Kallidin aktiviert. Im Gegensatz zum konstitutiv exprimierten B2R, der nach Stimulation schnell desensitisiert und internalisiert wird, erfolgt eine B1R-Expression fast ausschließlich unter pathophysiologischen Bedingungen über Induktion durch Zytokine. Nach Stimulation wird der B1R nicht internalisiert, sondern verbleibt an der Zelloberfläche. Beide Rezeptoren koppeln sowohl an Gαq/11 als auch an Gαi und aktivieren somit weitgehend identische Signalwege [vor allem Phospholipase Cβ (PLCβ) und „mitogen activated protein kinase“ (MAPK)-Kaskaden]. Durch ihre - besonders im Hinblick auf ihre Internalisierungs-eigenschaften - konträre Regulation, stellen die Bradykininrezeptoren ein interessantes Modell zur Untersuchung regulatorischer Mechanismen und deren Einflüsse auf die Signalübertragung von GPCRs dar. Beide Bradykininrezeptoren spielen bei inflammatorischen Prozessen eine Rolle. Sie fördern die Ausschüttung pro-inflammatorischer Zytokine und rekrutieren Immunzellen. Während entzündlicher Ereignisse kommt es zu erhöhter Zytokinfreisetzung z.B. von Interleukin-1β (IL-1β) und dadurch zur de novo Synthese von B1R. Pro-inflammatorische Zytokine wie IL-1β, die zur B1R-Expression führen, induzieren unter anderem aber auch einen Anstieg der Körpertemperatur (Fieber), eine häufige Begleiterscheinung inflammatorischer Vorgänge. Trotz des bekannten Zusammenhangs zwischen Inflammation und erhöhter Temperatur war über den Einfluss eines Temperaturanstiegs auf Membranrezeptoren und ihre Signalvermittlung auf zellulärer Ebene bisher nur sehr wenig bekannt. In dieser Arbeit wurde - unseres Wissens nach - erstmals auf die Temperatur als regulatorische Komponente für GPCR-vermittelte Signalübertragung eingegangen. Am Beispiel der Bradykininrezeptoren wurde gezeigt, dass die Stärke der Signalübertragung von GPCRs signifikant durch eine Temperaturerhöhung von 37°C auf 41°C beeinflusst werden kann. Hierbei war jedoch zwischen einer Temperaturabhängigkeit des Signalwegs selbst und einer rezeptorspezifischen Temperatursensitivität zu unterscheiden. So wurde die Aktivierung von ERK1/2 unter pathophysiologisch erhöhter Temperatur (41°C; normale Körpertemperatur: 37°C) signifikant gesteigert, unabhängig davon ob sie durch B1 oder B2 Rezeptoren stimuliert wurde. Die gesteigerte Aktivität PLCβ-vermittelter Signalkaskaden bei 41°C konnte hingegen auf eine nur für den B1R spezifische Temperaturabhängigkeit zurückgeführt werden. Diese Beobachtung zusammen mit der Tatsache, dass die B1R-Expression unter pathophysiologischen Bedingungen besonders induziert wird, deutet darauf hin, dass der B1R in Kombination mit Fieber eine verstärkte Wirkung im Organismus haben könnte. Ob diese Heilungs-fördernd oder -abträglich wirkt, müsste noch genauer untersucht werden. Neben dem Einfluss der Temperatur wird die Signalübertragung der GPCRs durch die jeweiligen Rezeptorkonformationen und die sich daraus ergebenden Funktionsunterschiede bestimmt. Die Familie A der GPCRs wird durch einige hoch konservierte Strukturmerkmale wie die E/DRY-Sequenz mit R3.50 in der dritten Transmembrandomäne (TM) oder die NPXXY-Sequenz am Ende der siebten TM charakterisiert. Publizierte Ergebnisse deuten darauf hin, dass bovines Rhodopsin durch eine Salzbrücke zwischen R3.50135 (TM3) und E6.30247 (TM6), auch „ionic lock“ genannt, im inaktiven Zustand gehalten wird. Der B2R ist einer der wenigen Peptid-GPCRs, der ein Glutamat an Position 6.30 (E6.30238) trägt, und eignete sich daher zur Untersuchung der Anwesenheit und Funktion eines möglichen „ionic lock“ auch in „nicht-Rhodopsin“-GPCRs. Für alle bisher entsprechend untersuchten GPCRs ist bekannt, dass R3.50 für eine effiziente G-Protein-Aktivierung unabdingbar ist (selbiges wurde in der vorliegenden Arbeit auch für den B2R bestätigt). Die funktionelle Analyse eines „ionic lock“ anhand einer R3.50 Mutation und G-Protein-abhängiger Kaskaden ist deshalb nicht möglich. Die Rolle eines „ionic lock“ im Hinblick auf G-Protein-unabhängige Mechanismen wie die Rezeptorinternalisierung, einem wichtigen Regulationsschritt für die meisten GPCRs, wurde bisher jedoch noch nicht untersucht. In der vorliegenden Arbeit wurde erstmals gezeigt, dass die Rezeptorendozytose durch Mutation von R3.50128 zu Alanin (R3.50128A), im Gegensatz zur G-Protein-Aktivierung, nicht zum Erliegen kommt. Die mutierten Rezeptorkonstrukte wiesen sogar ein konstitutives Internalisierungsverhalten auf. Dies verwies auf unterschiedliche Funktionen dieser Aminosäure bei der G-Protein-vermittelten Signaltransduktion und bei der Rezeptorinternalisierung. Ein Aufbrechen des möglichen „ionic lock“ durch Mutation von E6.30238 zu Alanin oder Arginin resultierte ebenfalls in konstitutiv internalisierenden Rezeptorkonstrukten. Im Gegensatz zur Endozytose zeigten diese Mutanten zwar keine konstitutive Signalübertragung, wurden aber auch durch prinzipiell als Antagonisten klassifizierte Verbindungen effizient aktiviert. Diese Ergebnisse legen einen mehrstufigen Aktivierungsprozess nahe, dessen Stufen sich durch verschiedene Rezeptorkonformationen mit unterschiedlichen Interaktionsmöglichkeiten für die G-Protein-Rekrutierung/Aktivierung oder mit der Internalisierungsmaschinerie [GPCR-Kinasen (GRKs), Arrestine] auszeichnen. Der wechselseitige Austausch der beiden hoch konservierten Aminosäuren R3.50128 und E6.30238 ermöglichte wahrscheinlich die Bildung eines inversen „ionic lock“, wodurch normales B2R-Verhalten wieder hergestellt wurde. Diese Arbeit zeigt somit erstmals, dass ein Aufbrechen eines möglichen „ionic lock“ in einem Peptidrezeptor unterschiedliche Auswirkungen für die Prozesse der G-Protein-Aktivierung und der Rezeptorendozytose haben kann. Dadurch wird die Annahme bestärkt, dass es bei einem GPCR mehrere aktive Konformationen geben kann, die unterschiedliche Affinitäten gegenüber regulatorischen Proteinen (GRKs, Arrestinen) oder Effektoren (G-Proteinen, Arrestinen) aufweisen und dadurch differenziert zelluläre Signale auslösen können. Die Aufklärung der unterschiedlichen Aktivierungsmechanismen von GPCRs in Kombination mit der Herstellung von Verbindungen z.B. sogenannten „small molecule compounds“, die bestimmte Rezeptorkonformationen mit ihren signalspezifischen Eigenschaften stabilisieren können, wäre möglicherweise für die Entwicklung von Agonisten oder Antagonisten, die nur ganz bestimmte Signalwege modulieren und so eine optimierte therapeutische Anwendung erlauben, hilfreich.

In dieser Arbeit wurde das GABAerge System in Leydig-Zellen detailliert analysiert. Mehrere GABAA und GABAC Rezeptor Untereinheiten sowie das GABA synthetisierende Enzym GAD 67 und der vesikuläre GABA Transporter VIAAT konnten mit RT – PCR, Western Blot und Immunfluoreszenz-Experimenten in TM3, Leydig-Tumorzellen, und primären adulten Leydig-Zellen nachgewiesen werden. Es gelang molekulare Signaltransduktionswege von GABA aufzudecken: Gen Array, Western Blot und semiquantitative RT – PCR Experimente zeigten, dass GABA und der GABAA Rezeptor Agonist Isoguvacin den Transkriptionsfaktor egr-1 in TM3 und adulten Leydig-Zellen induzieren. Western Blot Experimente lassen schließen, dass GABA vermittelt über GABAA Rezeptoren die MAP – Kinasen ERK 1/2 in TM3 Zellen phosphoryliert und somit in den enzymatisch aktiven Zustand überführt. In primären adulten Leydig-Zellen konnte weiterhin gezeigt werden, dass GABA die Testosteron Produktion steigert. Elektrophysiologische Untersuchungen der TM3 und der primären adulten Leydig-Zellen zeigten schließlich, dass das initiale GABA Signal nicht über einen für GABAA Rezeptor typischen Cl--Strom vermittelt wird. Die RT – PCR Analyse von postnatalen Mäusehoden ergab ebenfalls, dass GAD 67, VIAAT und mehreren GABAA und GABAC Rezeptor Untereinheiten in dieser Entwicklungsphase des Hodens anwesend sind und lieferten ferner Hinweise dafür, dass sich insbesondere die Expression der Rezeptor Untereinheiten in der postnatalen Periode im Hoden ändert. Darüber hinaus konnte nachgewiesen werden, dass proliferierende interstitielle Zellen im postnatalen Rattenhoden immunopositiv für egr-1 sind. Somit ist eine physiologische Funktion von egr-1 in dieser Phase der Leydig-Zellentwicklung plausibel.

gamma-Aminobutyric acid (GABA) is an emerging signalling molecule in endocrine organs, since it is produced by endocrine cells and acts via GABA(A) receptors in a paracrine/autocrine fashion. Testicular Leydig cells are producers and targets for GABA. These cells express GABA(A) receptor subunits and in the murine Leydig cell line TM3 pharmacological activation leads to increased proliferation. The signalling pathway of GABA in these cells is not known in this study. We therefore attempted to elucidate details of GABA(A) signalling in TM3 and adult mouse Leydig cells using several experimental approaches. TM3 cells not only express GABA(A) receptor subunits, but also bind the GABA agonist {[}H-3] muscimol with a binding affinity in the range reported for other endocrine cells (K-d = 2.740 +/- 0.721 nM). However, they exhibit a low B-max value of 28.08 fmol/mg protein. Typical GABA(A) receptor-associated events, including Cl- currents, changes in resting membrane potential, intracellular Ca2+ or cAMP, were not measurable with the methods employed in TM3 cells, or, as studied in part, in primary mouse Leydig cells. GABA or GABA(A) agonist isoguvacine treatment resulted in increased or decreased levels of several mRNAs, including transcription factors (c-fos, hsf-1, egr-1) and cell cycle-associated genes (Cdk2, cyclin D1). In an attempt to verify the cDNA array results and because egr-1 was recently implied in Leydig cell development, we further studied this factor. RT-PCR and Western blotting confirmed a time-dependent regulation of egr-1 in TM3. In the postnatal testis egr-1 was seen in cytoplasmic and nuclear locations of developing Leydig cells, which bear GABA(A) receptors and correspond well to TM3 cells. Thus, GABA acts via an untypical novel signalling pathway in TM3 cells. Further details of this pathway remain to be elucidated. Copyright (c) 2005 S. Karger AG, Basel