Podcasts about transgen

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Best podcasts about transgen

Latest podcast episodes about transgen

Krazy Truth
Krazy Truth about Swinging #328 Summer time tips and Exxxotica review!

Krazy Truth

Play Episode Listen Later Apr 27, 2025 58:40


This week we are reminding folks of some helpful tips and bits for summer time events.  Outdoors, naked, fun and sun anddddddd all the things that can happen.  We also so spend just a few minutes reviewing the great experience we had at Exxxotica in Chicago.  So Give this week a listen!https://www.basisdx.org?utm_medium=referral&utm_source=124&utm_campaign=z&utm_content=y&utm_term=xhttps://mycupcondom.com/discount/KASBH10    My cup condomhttp://www.motorbunny.comhttp://www.asnlifestylemagazine.comhttp://www.fullswapshop.comhttps://www.onlyfans.com/msamandakasbh: http://www.krazykasbh.com:  http:// www.youtube.com/kasbhTwitter:  @TruthKrazySupport the show

Kasbh's Rant
Kasbh's Rant #155 Share your knowledge!

Kasbh's Rant

Play Episode Listen Later Apr 1, 2024 22:46


This week we are talking about actually helping the newest members of our community and not just laughing or turning away.  Having the honest conversations that will make a world of difference to new people and the community as a whole.https://mycupcondom.com/discount/KASBH10    My cup condomhttp://www.motorbunny.comhttp://www.asnlifestylemagazine.comhttp://www.fullswapshop.comhttp://www.smokinmeatsbbqtreats.comhttps://www.onlyfans.com/msamandakasbh: http://www.krazykasbh.com:  http:// www.youtube.com/kasbhemails krazy.kasbh@gmail.comTwitter:  @TruthKrazy

rePROs Fight Back
"rePROs Fight Back" trailer

rePROs Fight Back

Play Episode Listen Later Sep 12, 2023 1:03


Love Podcasts? Love bodily autonomy? Want to get engaged in the fight for sexual and reproductive health, rights, and justice? Then this is the podcast for you.  Each episode host Jennie Wetter has a guest on to do a deep dive into issues ranging from abortion, birth control, trans rights, abortion, child marriage, sex education, LGBTQ+ rights, and did we mention abortion. Join us to learn more about the fight for sexual and reproductive health, rights, and justice and what you can do to fight back. Support the showFollow Us on Social: Twitter: @rePROsFightBack Instagram: @reprosfbFacebook: rePROs Fight Back Email us: jennie@reprosfightback.comRate and Review on Apple PodcastThanks for listening & keep fighting back!

UnterBlog
Kunstfleisch, Kunstmilch, Landwirtschaftliche Revolution, KI, Autonomes Fahren - Zero to One

UnterBlog

Play Episode Listen Later Jun 30, 2023 41:31


✘ Werbung: Mein Buch Katastrophenzyklen ► https://amazon.de/dp/B0C2SG8JGH/ - Eine landwirtschaftliche #Revolution bahnt sich an. #Künstliche #Nahrung kann in Zukunft billiger und in größeren Mengen hergestellt werden, als es heute die Landwirtschaft kann. Und damit die Konzerne schneller an ihren Gewinn kommen, macht man den Landwirten das Leben immer schwerer und versucht sie zum Aufgeben zu bewegen/zwingen. Alles unter dem Mäntelchen der grünen Bewegung. Dieser Vorgang ist nicht einmalig. Auf mehreren Gebieten haben die Konzerne mit Erfolg versucht, sich den zukünftigen Kuchen mit fragwürdigen Methoden frühzeitig zu sichern. - Lars Thomsen bei Mario Lochner ► https://youtu.be/n2LMpUJ6Rg4 Verschwörungen ► https://youtu.be/i9f_BlcIg4I Gebäudeenergiegesetz ► https://youtu.be/-nyFNiX2xyw Nahrungsmittelkrise ► https://youtu.be/z2bOhzfJ4KE Moderner Landwirt ► https://www.youtube.com/@ModernerLandwirt - Zero to One ► https://amazon.de/Zero-One-Notes-Future-English-ebook/dp/B00KHX0II4/ Waymo vs. Tesla ► https://youtu.be/Hv9HtWUf27s Imkerbund ► https://deutscherimkerbund.de/527-Honigbienenhaltung_Statistik_2021 Agrarheute Bienen ► https://www.agrarheute.com/pflanze/insekten-bestaeuben-getreide-zdf-blamiert-biologieunwissen-604797 Agrarheute Milch ► https://www.agrarheute.com/tier/rind/milch-ohne-kuehe-remilk-baut-weltweit-groesste-anlage-daenemark-593167 Käsewerk ► http://www.das-kaesewerk.de/analogkase-was-ist-analogkaese/ Transgen ► https://transgen.de/lebensmittel/2700.fleisch-zellkultur-biotechnologie.html - 0:00 Einleitung | Zero to One 7:41 Verschwörungen 8:36 ESG 10:01 Marktvorbereitung 15:15 Landwirtschaft unter Druck 18:37 Insekten und Genfood 20:07 Eiweißkrise | Proteine 21:32 ZDF und Bienen 25:42 Künstliche Lebensmittel 34:07 Kunstfleisch

Un Minuto Con Las Artes www.unminutoconlasartes.com
Entrevista con Luis Carlos Azuaje, ganador del XX Premio Anual Transgenérico

Un Minuto Con Las Artes www.unminutoconlasartes.com

Play Episode Listen Later Mar 22, 2023 53:42


Un Minuto con las Artes, la Academia en tu Radio, con Susana Benko, Álvaro Mata, Humberto Ortiz y Rafael Castillo Zapata. Al aire por Radio Capital 710 AM el miércoles 22 de marzo de 2023.

Best of Columbia On Demand
Wake-Up Mid-Missouri Tue. 3/21 7a

Best of Columbia On Demand

Play Episode Listen Later Mar 21, 2023 32:55


The latest on Transgen legislation in JC...one of the highlights of the CPS school board candidate forum from last night. What is "Modern Republicanism" and why are we talking about Fruit Rollups!

NewsMaker Talks
„Dați-le copiilor șansa să fie ceea ce consideră că sunt”. Podcast NM cu Stela Pascal, o femeie transgen din Chișinău

NewsMaker Talks

Play Episode Listen Later Apr 21, 2022 63:37


Despre sinuciderea lui Felis, minora trans care a fost supusă bullyingului din partea colegilor de școală, a vorbit întreaga țară. Activiștii GENDERDOC-M, centrul unde pot găsi sprijin persoanele LGBT+, a organizat un protest în fața Guvernului, iar doi deputați ai partidului de guvernare au anunțat că vor monitoriza cu atenție cazul și acțiunile poliției. S-ar fi putut evita tragedia dacă am fi stat mai bine la capitolul educație sexuală și toleranță? Despre cum trăiesc în R. Moldova persoanele trans, ce presupune și cât costă procesul de tranziție, ce își doresc și ce le lipsește, dar și cum ar trebui să reacționeze părinții care observă un comportament diferit ai copiilor, a discutat redactorul NM Stela Untilă cu Stela Roxana Pascal, o femeie trans, care după moartea lui Felis a inițiat o petiție online, în care a formulat cinci probleme ale persoanelor transgen.

Kate Dalley Radio
030722 Transgen Sports Bill Caucus Tues Night Election Fraud Event State Senators

Kate Dalley Radio

Play Episode Listen Later Mar 8, 2022 45:43


030722 Transgen Sports Bill Caucus Tues Night Election Fraud Event State Senators by Kate Dalley

Melli & Nelly
#18 Das Erbe unserer Eltern

Melli & Nelly

Play Episode Listen Later Feb 19, 2021 69:00


Winter, Eis und Schnee lässt uns im Sofa mit endlosen Kuscheldecken und Yogi-Tee versinken. Es sei denn, man folgt den Praktiken von Wim Hof, oder besser gesagt dem Ice Man. Seine Kältetherapie ist ein wahrer Erfolg – vor allem in der kalten Jahreszeit. Melli erklärt euch die drei Arten der Liebe aus der griechischen Philosophie, besser bekannt als Agape, Eros und Philia. Wir entdecken wieder einmal, dass Selbstliebe das höchste Gut ist, aber der Weg dorthin alles andere als einfach. Warum fällt dem Menschen das so schwer? Das liegt unter anderen an transgenerationaler Vererbung und unserem Familienmuster. Transgen-was? Keine Sorge, all das hat Melli mit einigen guten Beispielen darzubieten. Außerdem sprechen wir endlich über unsere Erfahrungen mit energetischen Aufstellungen. Es war Gänsehaut pur. Nelly berichtet von einem Rassismus-Seminar und warum die #BLM-Bewegung immer noch wichtig ist. Was kann aktiv getan werden und warum „Vogueness“ in diesem Fall nicht schadet, erfahrt ihr in dieser Folge! PS: Die Folge wird nicht so ernst, wie sie klingt, versprochen!

Corpo, Mente e Spirito
Il secondo ordine dell'amore a tavola: costellazioni familiari

Corpo, Mente e Spirito

Play Episode Listen Later Dec 9, 2019 2:10


Buongiorno, nel podcast precedente abbiamo accennato agli ordini dell'amore che sono emersi dalle costellazioni familiari. Riprendiamo il concetto del secondo ordine e vediamo come possiamo applicarlo in maniera pratica nella vita ordinaria per allinearsi esternamente a questo ordine. In questo modo, con un'azione esterna, soprattutto se costantemente ripetuta, faciliteremo il sorgere di un ordine interno.

Spiritual Wannabe
73. Transgenerational Healing with Usha - Part II

Spiritual Wannabe

Play Episode Listen Later Jan 16, 2019 7:53


Part II of my chat with Usha. This one has more on what you can do at home to experience a bit of Transgen healing.

Spiritual Wannabe
72. Transgenerational Healing - An interview with Usha, the healer- Part I.

Spiritual Wannabe

Play Episode Listen Later Jan 13, 2019 11:10


I did this intense Transgen healing workshop over the weekend. I spoke to Usha, who conducts this workshop on details of the workshop. Here’s Part I of the interview.

Writing Alchemy
Fairy Tale 11 – The Wishing Dildo Series #2 with Vee Chattie

Writing Alchemy

Play Episode Listen Later Mar 27, 2017 57:56


In this second podcast segment of The Wishing Dildo Series, the fairy tale continues as Prince Hart, Tala, and Tomas meet two new companions, each with a unique magical superpower. Then activist, comedian, and sex worker Vee Chattie joins Fay for the following discussion about the reality verses myth of sex work, sexual superpowers, boundaries, marginalization, and community. The Wishing Dildo Part 1: It is said that the Wishing Dildo can grant any wish relating to sexuality or fertility, as long as that wish is consensual. Prince Hart sure hopes that is true as he and his friend, trickster Tala, embark on a quest for it. As they travel, they soon discover that sometimes the greatest adventure is the people you meet along the way.

HomoLAB
homoLAB 87

HomoLAB

Play Episode Listen Later Apr 24, 2013 29:52


This week we talk to Chef Peter Norman about his new cookbook Pink! Gay Food, Plus a new Meningitis scare among men and Elton John works with Queens of the Stone Age on their new album, along with all the GayStarNews.

HomoLAB
homoLAB 78

HomoLAB

Play Episode Listen Later Feb 19, 2013 25:54


We are at the Press Launch of the 27th BFI London Lesbian & Gay Film Festival! Talking to the Festival Director, Programmers, and Film Makers about what we can look forward to in this years festival. Plus GayStarNews, Turkey declares Gay sex natural, and shocking homophobia at a Manchester Uni.

GVOZD
GVOZD - PIRATE STATION @ RECORD 26062012

GVOZD

Play Episode Listen Later Jun 27, 2012 121:35


Гостями этой Пиратской Станции стали новые звезды российской днб сцены: The Sta11ker (Боровичи) с взрывной смесью мэйнстрима и драмстепа и проект Suicide (Санкт - Петербург),  ошеломивший эфир тяжелой поступью дарксайд(даркстеп) вибраций! Я поиграл  разный прикольный новый мьюзик , неплохо дополняющий и разнообразящий миксы гостей!*) The STA11KER guest mix: 01).Xilent - Do It(Audio Porn Records) 02).Bungle feat. Ayah Marar - The Siren (Camo & Krooked Rmx)(Spearhead limited) 03).The Crystal Method feat. The Heavy - Play For Real (Dirtyphonics Remix) 04).The Sta11ker - Ex kick(Respect dub) 05).Nero - Crush On You (Knife Party Remix)(MTA Records) 06).Tha Trickaz - Kill it(Play Me Records) 07).Dcarl and Maksim - jump(Play Me Records) 08).Blokhe4d - Bang the Drum(Bad Taste Records) 09).The Sta11ker - Batteleship(Respect dub) 10).Netsky - Come Alive (Culture Shock Remix)(Hospital Records) 11).The Sta11ker - Crying(Respect dub) 12).Rockwell - Constantcomplexrhythmicsound(Shogun Audio) 13).Insideinfo - Bottled(feat Swatt)(Viper Records) 14).The Sta11ker - Thriller(Respect dub) GVOZD vibes 1. Mutated Forms - look what you have done(Cia dk) 2. Bit M Glory - boiled brain (dub) 3. Emperor - monolith (Modulations) 4. Fracture ft. Dawn Day Night - get busy (Exit) 5. Disept and Zendi - nanotechnology (Fokuz) 7. TRansgen - reincarnation (Audio Boutique) 8. Optiv and BTK - dont need you (Virus) 9. Phace and Misanthrop - progression (Neosignal) SUICIDE guest mix 1.NOiZeSKILL - Genocide[Egoist recordings] 2.Suicide - Globalization[dub] 3.Suicide - B.M.T.H.[Freak dub] 4.С-Netik - Cut The Pace[Yellow Stripe rec.] 5.Suicide feat SFS - Chromium(Suicide VIP)[Deadlines recordings] 6.Future Signal-Blood Bath[Freak Recordings dub] 7.Satan - Sick Generations 8.Dylan & Suicide - Untitled unfinished [Freak Recordings dub] 9.NOizeskill - Wall of DEath[Egoist recordings] GVOZD vibes 1. Foreign Concept and Xtrah - harsh reality (Critical) 2. Ill Audio - never be the same (Distinctive) 3. Desimal - sun signal (2004, free tune) 4. Culture Shock - troglodyte (Ram) 5. SPY - funk it (Hospital) 6. Agro Too and Greezey - intricate (MultiFunction) 7. Electrosoul System and Yana Kay - turn the lights off (Covert Operations, 2006) 8. NClear - arabian vibe (Soundtrax)

GVOZD
GVOZD - PIRATE STATION @ RECORD 26062012

GVOZD

Play Episode Listen Later Jun 27, 2012 121:35


Гостями этой Пиратской Станции стали новые звезды российской днб сцены: The Sta11ker (Боровичи) с взрывной смесью мэйнстрима и драмстепа и проект Suicide (Санкт - Петербург),  ошеломивший эфир тяжелой поступью дарксайд(даркстеп) вибраций! Я поиграл  разный прикольный новый мьюзик , неплохо дополняющий и разнообразящий миксы гостей!*) The STA11KER guest mix: 01).Xilent - Do It(Audio Porn Records) 02).Bungle feat. Ayah Marar - The Siren (Camo & Krooked Rmx)(Spearhead limited) 03).The Crystal Method feat. The Heavy - Play For Real (Dirtyphonics Remix) 04).The Sta11ker - Ex kick(Respect dub) 05).Nero - Crush On You (Knife Party Remix)(MTA Records) 06).Tha Trickaz - Kill it(Play Me Records) 07).Dcarl and Maksim - jump(Play Me Records) 08).Blokhe4d - Bang the Drum(Bad Taste Records) 09).The Sta11ker - Batteleship(Respect dub) 10).Netsky - Come Alive (Culture Shock Remix)(Hospital Records) 11).The Sta11ker - Crying(Respect dub) 12).Rockwell - Constantcomplexrhythmicsound(Shogun Audio) 13).Insideinfo - Bottled(feat Swatt)(Viper Records) 14).The Sta11ker - Thriller(Respect dub) GVOZD vibes 1. Mutated Forms - look what you have done(Cia dk) 2. Bit M Glory - boiled brain (dub) 3. Emperor - monolith (Modulations) 4. Fracture ft. Dawn Day Night - get busy (Exit) 5. Disept and Zendi - nanotechnology (Fokuz) 7. TRansgen - reincarnation (Audio Boutique) 8. Optiv and BTK - dont need you (Virus) 9. Phace and Misanthrop - progression (Neosignal) SUICIDE guest mix 1.NOiZeSKILL - Genocide[Egoist recordings] 2.Suicide - Globalization[dub] 3.Suicide - B.M.T.H.[Freak dub] 4.С-Netik - Cut The Pace[Yellow Stripe rec.] 5.Suicide feat SFS - Chromium(Suicide VIP)[Deadlines recordings] 6.Future Signal-Blood Bath[Freak Recordings dub] 7.Satan - Sick Generations 8.Dylan & Suicide - Untitled unfinished [Freak Recordings dub] 9.NOizeskill - Wall of DEath[Egoist recordings] GVOZD vibes 1. Foreign Concept and Xtrah - harsh reality (Critical) 2. Ill Audio - never be the same (Distinctive) 3. Desimal - sun signal (2004, free tune) 4. Culture Shock - troglodyte (Ram) 5. SPY - funk it (Hospital) 6. Agro Too and Greezey - intricate (MultiFunction) 7. Electrosoul System and Yana Kay - turn the lights off (Covert Operations, 2006) 8. NClear - arabian vibe (Soundtrax)

GVOZD
GVOZD - PIRATE STATION @ RECORD 03042012

GVOZD

Play Episode Listen Later Apr 3, 2012 117:00


Гостем этого эфира стал один из диджеев новой волны, который как и все мы любит драмнбэйс и живет им! Леди и джентльмАны, разрешите представить вам : RAZER STIL (Уфа) и его взрывоопасный и позитивный микс!!!Я перехватил иницитиву и старался восполнить весеннюю нехватку витаминов, но уже в сочетаниях разных кроссжанров и звуков, представляя новую музыку наших дней, открывая новые имена и лейблы и, конечно, не забывая о тех, кто своим примером побуждает нас(меня) продолжать этот Путь! Ведь..вместе мы - сила!   RAZER STIL guestmix: 1)Task Horizon - Kill The Pain (feat. Pedro Rodrigues) [C4C] 2)Porter Robinson - Spitfire (Kill The Noise Remix) [OWSLA] 3)Nero - Innocence (Camo & Krooked Bootleg Remix) [Unreleased] 4)Pendulum – Propane Nightmares (VIP Remix)[Warner Bros. Records] 5)Skrillex – Scary Monster and Nice Sprites (Dirtyphonics Remix)[Big Beat] 6)Camo & Krooked – Breezeblock [Hospital] 7)Metrik – Genesis [Viper] 8)Noisia - Could This Be [mau5trap] 9)Phace & Rockwell - Rat Race [Hospital] 10)Lynx - Who's This (feat Noisia & Seed)[Detail] 11)NRanges & Uberman - Totem [Tamrecords] 12)Yanntek - Audiosurf(Audiosurf EP)[Ammunition] 13)Soulstorm & Imprintz & Kloe - The Rupture [Ammunition] 14)Xilent - Tenkai [Mainframe] 15)Evol Intent - Middle Of The Night[EVOL INTENT] GVOZD spring sharpness : 1. Kooqla - night (Singlep rmx) (dub?) 2. Phors - shining star (Fokuz) 3. Grinda - orange label (Textures Music Group dub) 4. Joe Goddard - gabriel (Calibre rmx) (Greco-Roman ) 5. Shiller and Isis Gee - fate (TRansgen bootleg) 6. 2DB - happy days (Technique dub) 7. Ambrela - weather playing (dub) 8. Goldie ft. Natalie Duncan - freedom (Metalheadz) 9. Cyberworm - sporaw (Opposide free) 10. Run Tingz Cru ft. D.Boomah - it's a junglist ting (Hot rmx)(Run Tingz Cru) 11. Diligens ft. Gosha Ashog - romanticism (dub) 12. Serum and Heist - live at the apollo (Chronic dub) 13. Follix and Back Up & Sub Daymon - sense search (dub) 14. Zero T and Beta 2 - hang twice (Footprint dub, free) 15. LeStR - double ducker (dub) 16. Amit ft. Rani - you look better dead (Exit) 17. Tobax and Innersoul - u think (Syndrome Audio dub) 18. Hydro and Halogenix - disillusioned (Horizons) 19. Andy Pain and Z Connection - conveyor (Respect dub) 20. Break - here we go (Critical) 21. Item and No Signal - untitled (dub) 22. Freqax - political crime (Yellow Stripe) 23. Inerpois and Krieg - hierarchy (dub) 24. Freestylers - entertainer (Serial Killaz rmx) (Jungle Cakes)

GVOZD
GVOZD - PIRATE STATION @ RECORD 03042012

GVOZD

Play Episode Listen Later Apr 3, 2012 117:00


Гостем этого эфира стал один из диджеев новой волны, который как и все мы любит драмнбэйс и живет им! Леди и джентльмАны, разрешите представить вам : RAZER STIL (Уфа) и его взрывоопасный и позитивный микс!!!Я перехватил иницитиву и старался восполнить весеннюю нехватку витаминов, но уже в сочетаниях разных кроссжанров и звуков, представляя новую музыку наших дней, открывая новые имена и лейблы и, конечно, не забывая о тех, кто своим примером побуждает нас(меня) продолжать этот Путь! Ведь..вместе мы - сила!   RAZER STIL guestmix: 1)Task Horizon - Kill The Pain (feat. Pedro Rodrigues) [C4C] 2)Porter Robinson - Spitfire (Kill The Noise Remix) [OWSLA] 3)Nero - Innocence (Camo & Krooked Bootleg Remix) [Unreleased] 4)Pendulum – Propane Nightmares (VIP Remix)[Warner Bros. Records] 5)Skrillex – Scary Monster and Nice Sprites (Dirtyphonics Remix)[Big Beat] 6)Camo & Krooked – Breezeblock [Hospital] 7)Metrik – Genesis [Viper] 8)Noisia - Could This Be [mau5trap] 9)Phace & Rockwell - Rat Race [Hospital] 10)Lynx - Who's This (feat Noisia & Seed)[Detail] 11)NRanges & Uberman - Totem [Tamrecords] 12)Yanntek - Audiosurf(Audiosurf EP)[Ammunition] 13)Soulstorm & Imprintz & Kloe - The Rupture [Ammunition] 14)Xilent - Tenkai [Mainframe] 15)Evol Intent - Middle Of The Night[EVOL INTENT] GVOZD spring sharpness : 1. Kooqla - night (Singlep rmx) (dub?) 2. Phors - shining star (Fokuz) 3. Grinda - orange label (Textures Music Group dub) 4. Joe Goddard - gabriel (Calibre rmx) (Greco-Roman ) 5. Shiller and Isis Gee - fate (TRansgen bootleg) 6. 2DB - happy days (Technique dub) 7. Ambrela - weather playing (dub) 8. Goldie ft. Natalie Duncan - freedom (Metalheadz) 9. Cyberworm - sporaw (Opposide free) 10. Run Tingz Cru ft. D.Boomah - it's a junglist ting (Hot rmx)(Run Tingz Cru) 11. Diligens ft. Gosha Ashog - romanticism (dub) 12. Serum and Heist - live at the apollo (Chronic dub) 13. Follix and Back Up & Sub Daymon - sense search (dub) 14. Zero T and Beta 2 - hang twice (Footprint dub, free) 15. LeStR - double ducker (dub) 16. Amit ft. Rani - you look better dead (Exit) 17. Tobax and Innersoul - u think (Syndrome Audio dub) 18. Hydro and Halogenix - disillusioned (Horizons) 19. Andy Pain and Z Connection - conveyor (Respect dub) 20. Break - here we go (Critical) 21. Item and No Signal - untitled (dub) 22. Freqax - political crime (Yellow Stripe) 23. Inerpois and Krieg - hierarchy (dub) 24. Freestylers - entertainer (Serial Killaz rmx) (Jungle Cakes)

ERIC BORN MUSIC
Schiller - Fate with Isis Gee (TRansgen Drum and bass remix) full

ERIC BORN MUSIC

Play Episode Listen Later Apr 2, 2012 5:33


Trancestep, melodic

Fakultät für Biologie - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 02/06
Vergleichende Untersuchung der regulierten Genexpression von integrierter und episomaler HIV-1 LTR

Fakultät für Biologie - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 02/06

Play Episode Listen Later May 9, 2007


Erkenntnisse zur funktionalen Zellkernarchitektur wurden bisher überwiegend an fixierten Zellen durch in situ Methoden erlangt. Durch Etablierung eines Lebendzell-Systems sollte überprüft werden, ob es möglich ist, ein einzelnes Transgen auf DNA-Ebene zu visualisieren und es bei seiner transkriptionellen Aktivierung zu beobachten. Das hier entwickelte „Gene Positioning System“ (GePS) nutzt das Lac-Operator/Lac-Repressor-GFP-System („Gene Tag“) als visualisierende Komponente, um das Indikatorgen auf DNA-Ebene sichtbar zu machen. Das Indikatorgen selbst basiert auf der induzierbaren Transkriptionseinheit von HIV-1, die spezifisch durch das virale Protein Tat aktiviert werden kann und die Transkription eines Reportergens (DsRed) kontrolliert. Im transient transfizierten Status konnte das Indikatorgen als Episom durch Bindung des „Gene Tags“ als punktförmiges Signal im Kern detektiert werden. In den etablierten und charakterisierten Zelllinien HeLa-Indi war dies durch Bindung des „Gene Tags“ an 64 Lac-Repressor-Bindungsstellen eines einzelnen Transgens nicht möglich. Die Etablierung der stabilen Zelllinien und die transiente Expression ermöglichten einen direkten Vergleich der Transkription von der integrierten und episomalen HIV-1 LTR. In beiden Fällen konnte eine spezifische Transkriptionsaktivierung durch Tat auf Protein- und RNA-Ebene beobachtet werden. Auch eine Tat-unabhängige Basisaktivität in Form von Volllänge-Transkripten konnte immer nachgewiesen werden, die in verschiedenen Zelllinien und dem episomalen Indikatorgen aber zu keiner nachweisbaren Proteinexpression führte. Die induzierte Expression des Indikatorgens des „GePS“ konnte darüber hinaus in wichtigen HIV-1 Zielzellen (CD4 positive Lymphozyten) gezeigt werden. Des Weiteren konnten Erkenntnisse über die Tat-induzierte, von der HIV-1 LTR ausgehenden Transkription und der Zusammenhang zum Spleißen gewonnen werden. Durch quantitative PCR wurde deutlich, dass sowohl im epsiomalen als auch integrierten Status erst durch die gesteigerte Transkription das Spleißen der Indikatorgen-RNA induziert wird, das Spleißen also co-transkriptionell stattfindet. Tat selbst spielt bei der Rekrutierung von Spleißfaktoren nur eine indirekte Rolle, da durch die transkriptionsdefiziente Mutante Tat(K41A) kein Spleißen initiiert wird. Durch verschiedene methodische Ansätze wurde versucht, die Frage der Chromatinzusammensetzung von nicht replizierenden Episomen in menschlichen Zellen zu beantworten. Weder durch eine Colokalisations-Untersuchung noch eine Chromatin IP konnte jedoch eine spezifische Assoziation des episomalen Indikatorgens mit dem Histon H3 nachgewiesen werden. Eine Bindung von Proteinen an die Episomen konnte am Beispiel von p50, einer Untereinheit des Transkriptionsfaktors NFκB, gezeigt werden. Für die produktive Replikation der Retroviren ist die Integration der proviralen DNA ins Genom der Wirtszelle nötig, jedoch konnte für HIV gezeigt werden, dass nicht integrierte zirkuläre HIV-DNA in sich nicht teilenden Zellen persistiert. Die Ergebnisse dieser Arbeit unterstützen die Vermutung, dass nicht integrierte retrovirale DNA transkribiert werden kann und dadurch die exprimierten Proteine Bedeutung für den Lebenszyklus von HIV und durch ihre Persistenz Einfluss auf die Wirtszellen haben können.

Tierärztliche Fakultät - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 02/07
Nonviraler Gentransfer der felinen Zytokin-Gene IL-2, IFNγ und GM-CSF als adjuvante Immuntherapie beim Fibrosarkom der Katze

Tierärztliche Fakultät - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 02/07

Play Episode Listen Later Jul 15, 2005


Das feline Fibrosarkom hat mit einer Rezidivneigung von bis zu 70 % nach alleiniger chirurgischer Entfernung eine ungünstige Heilungsprognose. Auch adjuvante Chemo- oder Strahlentherapien führen nur in 42 % der Patienten zu einer rezidivfreien Zeit von über einem Jahr. In der vorliegenden Arbeit soll ein nonvirales Gentransfersystem etabliert werden, bei dem erstmalig eine Kombination aus drei felinen Zytokin-Genen zur adjuvanten Immunstimulation nach Tumorexstirpation beim Fibrosarkom der Katze eingesetzt wird. Ziel dieser Studie ist die Festlegung einer maximal tolerierten Dosis. Mit Hilfe eines Nebenwirkungskataloges, der auf der Common-Toxicity-Criteria-Tabelle des National Cancer Instiute basiert, werden klinische wie auch labordiagnostische Parameter objektiv erfasst und in Relation zur Therapie gestellt. Nach definierten Aufnahmekriterien werden Katzen mit Fibrosarkomen von prak-tischen Tierärzten an die Medizinische Kleintierklinik überwiesen. Es werden nur Tiere in die Studie aufgenommen, deren Tumoren (Primärtumor oder Rezidiv) am Rumpf lokalisiert sind. Die Tumorexstirpation muss in einer Sitzung möglich sein und darf dabei weder zu einer Gliedmaßenamputation noch zur Eröffnung einer Körperhöhle führen. Katzen, bei denen Hinweise auf Metastasen oder eine andere schwere Krankheit vorliegen, sowie Tiere, die bereits zuvor mit einer Chemo-, Strahlen- oder Gentherapie behandelt wurden, können nicht in die Studie aufge-nommen werden. Nach Tumorexstirpation wird den Tieren ein Kollagenschwamm in das Tumorbett implantiert. Dieser Kollagenschwamm trägt Plasmide, die jeweils für feIL-2, feIFNγ und feGM-CSF kodieren. Die Plasmid-DNA ist zusätzlich an Polyethylenimin (PEI) assoziiert und mit einem Hüllpolymer (P6YE5C) ummantelt. Insgesamt werden 15 Tiere in vier verschiedenen Dosisgruppen therapiert. Gruppe I (n=3) mit 75 μg je Plasmid, Gruppe II (n=3) mit 150 μg je Plasmid, Gruppe III (n=6) mit 300 μg je Plasmid und in Dosisgruppe IV (n=3) mit 600 μg je Plasmid. Als Ver-gleichsgruppe gelten vier Katzen, die unter gleichen Bedingungen nur mit einer en bloc Resektion behandelt werden. In die Studie werden 15 Katzen (mk=9, wk=6) im Alter zwischen drei und 15 Jahren aufgenommen. Die Fibrosarkome sind häufiger im Interscapularbereich lokalisiert. Bei keinem Patienten kommt es zu therapiebedingten Beeinträchtigungen des Allgemeinbefindens. Drei Katzen entwickeln postoperativ ein Serom, das ohne thera-peutisches Eingreifen resorbiert wird. Systemische Veränderungen, die auf die Therapie zurückgeführt werden, manifestieren sich erst in Dosisgruppe IV mit einem Abfall der Lymphozytenpopulation. Dabei fallen in einem Zeitraum bis 45 Tage nach Implantation des Kollagenschwammes die Lymphozyten bis zu 70 % des Ausgangs-wertes ab. Bei dieser Phase I-Studie handelt es sich um eine Dosisfindungsstudie. Diese wird durch das Auftreten erster Nebenwirkungen, die auf das Transgen oder auf dessen Expressionsprodukt zurückgeführt werden können, beendet. Die maximal tolerierte Dosis wird somit in vorliegender Studie auf 600 μg je Zytokin-Plasmid festgesetzt.

Tierärztliche Fakultät - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 01/07
Experimentelle Untersuchungen zum retroviralen Gentransfer in primäre Chondrozyten des Kaninchens

Tierärztliche Fakultät - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 01/07

Play Episode Listen Later Feb 13, 2004


Knorpeldefekte lassen sich nicht zufriedenstellend therapieren, da bis heute ein kontrollierter regenerativer Gewebeaufbau unmöglich war. Eine neue Strategie wäre eine Kombination von Chondrozytentransplantation mit gentherapeutischen Methoden, z. B. die stabile Ex-vivo-Transduktion von primären Chondrozyten mit retroviralen Vektoren, die gewebeaufbauende Zytokine exprimieren. Ziel der vorliegenden Arbeit war deshalb Etablierung und Optimierung des retoviralen Gentransfers in primäre Kaninchenchondrozyten und die Beobachtung von Verbleib, Vitalität und Genexpression der Zelltransplantate in vivo. Transduzierte Zellen sollten ohne weitere Selektionsverfahren für eine spätere Transplantation verwendet werden können. Da regulierbare Genexpression in einem solchen Modell von Vorteil ist, war ein weiteres Ziel die Entwicklung retroviraler Tet-On-Vektoren. Es wurden konstitutiv exprimierende retrovirale Vektoren und Tet-On-Vektoren kloniert und Retroviren mit unterschiedlichen Infektionsspektren generiert. Effizienz und Stabilität des Gentransfers wurden ohne weitere Selektionsverfahren mit Hilfe konstitutiv nlslacZ-exprimierender retroviraler Vektoren in vitro und in vivo beurteilt. Zusätzlich wurde stellvertretend für ein therapeutisches Gen der Wachstumsfaktor hbmp-2 transferiert. Retrovirale Ein-Vektor-Systeme, die den reversen Transaktivator rtTA2s-M2 und den Tet-responsive Promotor enthielten, wurden in vitro durch die Expression der Reportergene nlslacZ oder egfp in verschiedenen Zelllinien getestet. Mit VSV.G-pseudotypisierten Retroviren konnte eine Transduktionseffizienz von bis zu 99 % erzielt werden, amphotrope Viren waren deutlich weniger effizient. Transduzierte Chondrozyten zeigten in vitro über mindestens 12 Wochen eine stabile Transgenexpression, die auch in 3D-Kultur auf Kollagenschwämmen fortbestand. In vivo war für mindestens drei Wochen Transgenexpression nachweisbar. hbmp-2 transduzierte Zellen exprimierten zudem dieses Transgen in vitro. Die neu entwickelten Tetrazyklin-induzierbaren Retroviren zeigten eine starke Basalexpression bei nur geringer Steigerung nach Induktion mit Doxyzyklin. Die Transduktionseffizienz dieser Retroviren war wesentlich geringer als bei der Verwendung konstitutiv exprimierender Vektoren. VSV.G-pseudotypisierte Retroviren sind eine optimale Methode für den retroviralen Gentransfer in primäre Kaninchenchondrozyten ohne weitere Selektionsverfahren. Neben dem Transfer von Markergenen ist dies die Grundlage für den Transfer von therapeutischen Genen, um deren Effekt in vitro und in vivo zu untersuchen. Zudem wurde ein neuartiger universal einsetzbarer Vektor entwickelt, der die Klonierung in die retroviralen U3 Region und somit die Konstruktion retroviraler Double-copy-Vektoren erlaubt. Die Entwicklung zuverlässiger retroviraler Tet-On-Vektoren bleibt weiterhin eine Herausforderung für die Zukunft.

Fakultät für Biologie - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 01/06
Entwicklung von GM-CSF-produzierenden EBV-Vektoren für die Immuntherapie der B-CLL

Fakultät für Biologie - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 01/06

Play Episode Listen Later Jul 22, 2003


Die Immuntherapie von niedrig malignen Tumoren stellt eine vielversprechende alternative Behandlungsmethode dar. Epstein Barr-Virus (EBV) etabliert eine latente Infektion in der Zielzelle, in der das EBV-Genom extrachromosomal aufrecht erhalten wird. EBV eignet sich mit diesen Eigenschaften hervorragend als Genvektor. Meine Aufgabenstellung war es, neue EBV-abgeleitete Genvektoren zu entwickeln, die das therapeutische Zytokin GM-CSF in Tumorzellen von B-CLL-Patienten (Chronische lymphatische Leukämie) exprimieren. Dabei entscheidend ist die Eigenschaft von EBV naive, wie auch reife und maligne B-Lymphozyten über den CD21-Rezeptor spezifisch zu infizieren. Als Grundlage diente das Maxi-EBV-System, mit dem das EBV-Genom für genetische Veränderungen zugänglich ist. Im Rahmen dieser Arbeit wurde ein sicherer EBV-Basis-Vektor etabliert, der replikations-defizient ist und dem zusätzlich die immortalisierenden Eigenschaften von EBV fehlen. Im selben Zuge wurden verschiedene Expressionskassetten für das Transgen GM-CSF in den EBV-Basis-Vektor eingebracht. Es konnten fünf unterschiedliche GM-CSF-Vektoren etabliert werden, die das Transgen an verschiedenen Genorten innerhalb des Maxi-EBV-Genoms tragen. Zwei dieser GM-CSF-Vektoren erzielten besonders hohe Transduktionseffizienzen und Expressionsraten in der Modellzelllinie Raji (Burkitt-Lymphom-B-Zelllinie). Auch B-CLL-Zellen konnten mit guter Effizienz transduziert werden, die Expression des GM-CSF war aber deutlich schwächer. Das immunstimulatorische Zytokin GM-CSF führt in vivo zu einer verbesserten Immunantwort gegen Tumore. Es konnte in dieser Arbeit gezeigt werden, dass GM-CSF-haltige Überstände von Vektor-transduzierten Raji-Zellen eine Reifung von dendritischen Zellen (DC) bewirken, die als wichtige Effektoren bei einer Anti-Tumorantwort gelten. Die Funktion von GM-CSF konnte auch anhand eines Proliferationsversuchs mit einer Zytokin-abhängigen Zelllinie gezeigt werden. Darüber hinaus waren DC nach exogener Antigenbeladung in der Lage, spezifischen CD4-positiven T-Zell-Klonen effizienter ein antigenes Peptid zu präsentieren, wenn die DC in Gegenwart von GM-CSF gereift waren. Damit zeigt das nach Gentransfer sezernierte GM-CSF einen immunstimulatorischen Effekt ähnlich dem von rekombinantem GM-CSF und kann eine effizientere Antigenpräsentation von Tumorantigenen hervorrufen. Prinzipiell eignen sich B-CLL-Zellen daher als Produzenten von EBV-Genvektor-transduziertem GM-CSF, das zur immunologischen Demaskierung von B-CLL-spezifischen, tumor-assoziierten Antigenen auch in vivo führen sollte.