Podcasts about sh3

The Government has announced the reversal of speed limit reductions on a large number of New Zealand roads, including many in the northern regions of the country. The move will result in speed limits being increased on 38 sections of key routes, including parts of State Highway 1 in Northland, SH16 near Auckland and SH3 in Hamilton. Also on the list are changes to SH2 between Featherston and Masterton, and SH3 Whanganui. Making the announcement in Wairarapa, where the speed limit increase will save drivers around three minutes on their journey, Transport Minister Chris Bishop said: “It all adds up - that is productivity and growth.” Viastrada Certified Safe System Assessor and Level Crossing Safety Impact Assessor Glenn Koorey says the move goes against evidence that lower speeds make for safer roads, but there are some areas where putting the limit up can be justified. LISTEN ABOVESee omnystudio.com/listener for privacy information.

Robin discusses the reopening of Te Whare o Rehua Sarjeant Gallery after a $70m makeover. Roading updates in the ongoing saga that is the Mt Messenger bypass project on SH3, as well as the multi-million dollar shortfall in New Zealand Transport Agency (NZTA) funding that has left the New Plymouth council short. And an Opunake farmer says a new service at Taranaki Base Hospital has changed his life. RNZ's Taranaki reporter, Robin Martin

Join Msgr. John Esseff as he introduces us to the Enthronement of the Sacred Heart and of its incredible importance. The post SH3 – The Gifts of the Sacred Heart – Building a Kingdom of Love with Msgr. John Esseff – Discerning Hearts Podcast appeared first on Discerning Hearts Catholic Podcasts.

In this week's episode we'll discuss the effects of voxelotor on cerebral blood flow in pediatric sickle cell disease, learn more about venous and arterial thrombosis in patients with Vexas syndrome, and discuss differential sensitivity to tyrosine kinase inhibitors in ABL-class acute lymphoblastic leukemia. Featured Articles:The influence of voxelotor on cerebral blood flow and oxygen extraction in pediatric sickle cell disease Venous and arterial thrombosis in patients with VEXAS syndrome Tyrosine kinase inhibitor response of ABL-class acute lymphoblastic leukemia: The role of kinase type and SH3 domain 

Link to bioRxiv paper: http://biorxiv.org/cgi/content/short/2023.06.30.547304v1?rss=1 Authors: Mallik, B., Kushwaha, S., Bisht, A., MJ, H., Frank, C. A., Kumar, V. Abstract: Synaptic morphogenesis involves an interplay of multiple signaling pathways and requires membrane remodeling and cytoskeleton dynamics. We identified the BAR-domain protein dAsap (Arf GAP, SH3, Ankyrin repeat, and PH domain) as one of the regulators of synaptic morphogenesis. Loss of dAsap results in decreased bouton numbers, increased inter-bouton diameter, and disrupted microtubule organization at the nerve terminals. Electrophysiological analysis of the mutants revealed a gain in neurotransmission compared to control neuromuscular junctions (NMJs). dAsap mutant NMJs have increased evoked amplitude, increased spontaneous miniature frequency, and significantly fewer synaptic failures in low calcium. Consistent with these observations, dAsap mutants have increased active zone number. Additional pharmacological and genetic manipulations that are known to impair calcium release from stores suppress the dAsap phenotypes. Finally, we show that expressing a GDP-locked form of Arf6 in dAsap mutants restored the NMJ morphological defects, disrupted cytoskeleton, and aberrant neurotransmission. Thus, we propose a model in which dAsap regulates NMJ morphogenesis and synaptic calcium homeostasis through Arf6-dependent neuronal signaling. Copy rights belong to original authors. Visit the link for more info Podcast created by Paper Player, LLC

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Wild Bill learns that through fellowshipping with God, we can recognize His voice and understand His plan for our lives. “Our fellowship is with the Father, and with His Son, Jesus Christ.” 1 John 1:3 SH3 #biblelessonsforkids, #prayer, #fellowshipwithGod, #godanswersprayer, #followtheleader, #lordshipofjesus, #christiankids, #jesuschrist, #bedtimestoriesforkids, #storiesforchristiankids, #fishbytesforkids, #fishbytes4kids, #fishbitesforkids, #fishbites4kids, #ronandcarriewebb, #roncarriewebb

Wild Bill learns that through fellowshipping with God, we can recognize His voice and understand His plan for our lives. “Our fellowship is with the Father, and with His Son, Jesus Christ.” 1 John 1:3 SH3 #biblelessonsforkids, #prayer, #fellowshipwithGod, #godanswersprayer, #followtheleader, #lordshipofjesus, #christiankids, #jesuschrist, #bedtimestoriesforkids, #storiesforchristiankids, #fishbytesforkids, #fishbytes4kids, #fishbitesforkids, #fishbites4kids, #ronandcarriewebb, #roncarriewebb

A new editorial paper was published in Oncotarget's Volume 14 on March 21, 2023, entitled, “Impact of cortactin in cancer progression on Wnt5a/ROR1 signaling pathway.” In this editorial, researchers Kamrul Hasan and Thomas J. Kipps from the University of California discuss cortactin—an intracellular cytoskeletal protein that can undergo tyrosine phosphorylation upon external stimulation and promote polymerization and the assembly of the actin filament that is required for cell migration. Upon stimulation, cortactin binds and activates actin related protein Arp2/3 complex, a de novo actin nucleator that can induce F (filamentous)-actin polymerization [1, 2]. Cortactin (also known as EMS1 or CTTN) is expressed broadly in a variety of cancers, for which it plays an apparent role in cellular protrusions, which include lamellipodia and filopodia formation to promote migration and metastasis. Moreover, cortactin is expressed in (i) primary chronic lymphocytic leukemia (CLL) and primary breast-cancer cells, (ii) at least 15% of metastatic breast carcinomas, and (iii) CLL or breast-cancer cell-lines [3, 4]. In structure, cortactin contains a SH3 domain that allows it to bind characteristic motifs (-P-X-X-P-), which can be found in the proline-rich-domains (PRD) of other proteins, including receptor-tyrosine-kinase-like orphan receptor 1 (ROR1) [1, 3, 4]. “We have found (as have other investigators) that ROR1 is expressed by a variety of human cancers, which include CLL and breast cancer, suggesting that ROR1 may play a role in cancer pathogenesis [3–5].” Editorial paper: DOI: https://doi.org/10.18632/oncotarget.28386 Correspondence to: Thomas J. Kipps - tkipps@ucsd.edu Keywords: cortactin, Wnt5a, ROR1, migration, metastasis Subscribe for free publication alerts from Oncotarget - https://www.oncotarget.com/subscribe/ About Oncotarget Oncotarget is a primarily oncology-focused, peer-reviewed, open access journal. Papers are published continuously within yearly volumes in their final and complete form, and then quickly released to Pubmed. On September 15, 2022, Oncotarget was accepted again for indexing by MEDLINE. Oncotarget is now indexed by Medline/PubMed and PMC/PubMed. To learn more about Oncotarget, please visit https://www.oncotarget.com and connect with us: SoundCloud - https://soundcloud.com/oncotarget Facebook - https://www.facebook.com/Oncotarget/ Twitter - https://twitter.com/oncotarget Instagram - https://www.instagram.com/oncotargetjrnl/ YouTube - https://www.youtube.com/@OncotargetJournal LinkedIn - https://www.linkedin.com/company/oncotarget Pinterest - https://www.pinterest.com/oncotarget/ Reddit - https://www.reddit.com/user/Oncotarget/ Media Contact MEDIA@IMPACTJOURNALS.COM 18009220957

Link to bioRxiv paper: http://biorxiv.org/cgi/content/short/2023.02.27.530328v1?rss=1 Authors: Rodriguez-Polanco, W. R., Norris, A., Velasco, A. B., Gleason, A., Grant, B. Abstract: After endocytosis, many plasma membrane components are recycled via narrow-diameter membrane tubules that emerge from early endosomes to form recycling endosomes, eventually leading to their return to the plasma membrane. We previously showed that the F-BAR and SH3 domain Syndapin/PACSIN-family protein SDPN-1 is required in vivo for basolateral endocytic recycling in the C. elegans intestine. Here we sought to determine the significance of a predicted interaction between the SDPN-1 SH3 domain and a target sequence in PXF-1/PDZ-GEF1/RAPGEF2, a known exchange factor for Rap-GTPases. We found that endogenous mutations we engineered into the SDPN-1 SH3 domain, or its binding site in the PXF-1 protein, interfere with recycling in vivo, as does loss of the PXF-1 target RAP-1. Rap-GTPases have been shown in several contexts to negatively regulate RhoA activity. Our results show that RHO-1/RhoA is enriched on SDPN-1 and RAP-1 positive endosomes in the C. elegans intestine, and loss of SDPN-1 or RAP-1 elevates RHO-1(GTP) levels on intestinal endosomes. Furthermore, we found that depletion of RHO-1 suppressed sdpn-1 mutant recycling defects, indicating that control of RHO-1 activity is a key mechanism by which SDPN-1 acts to promote endocytic recycling. RHO-1/RhoA is well-known for controlling actomyosin contraction cycles, although little is known of non-muscle myosin II on endosomes. Our analysis found that non-muscle myosin II is enriched on SDPN-1 positive endosomes, with two non-muscle myosin II heavy chain isoforms acting in apparent opposition. Depletion of nmy-2 inhibited recycling like sdpn-1 mutants, while depletion of nmy-1 suppressed sdpn-1 mutant recycling defects, indicating actomyosin contractility in controlling recycling endosome function. Copy rights belong to original authors. Visit the link for more info Podcast created by Paper Player, LLC

Link to bioRxiv paper: http://biorxiv.org/cgi/content/short/2023.01.04.522504v1?rss=1 Authors: Blake, T. C. A., Fox, H. M., Urbancic, V., Wolowczyk, A., Allgeyer, E. S., Mason, J., Gallop, J. L. Abstract: Filopodia are narrow actin-rich protrusions with important roles in neuronal development. The neuronally-enriched TOCA-1/CIP4 family of F-BAR and SH3 domain adaptor proteins have emerged as upstream regulators that link membrane interactions to actin binding proteins in lamellipodia and filopodia, including WAVE and N-WASP nucleation promoting factors and formins. Here, we demonstrate a direct interaction between TOCA-1 and Ena/VASP actin filament elongators that is mediated by clustered SH3 domain interactions. Using Xenopus retinal gangion cell axonal growth cones, where Ena/VASP proteins have a native role in filopodia extension, we show that TOCA-1 localises to filopodia and lamellipodia with a retrograde flow of puncta and correlates with filopodial protrusion. Two-colour single molecule localization microscopy of TOCA-1 and Ena supports their nanoscale association. TOCA-1 clusters coalesce at advancing lamellipodia and filopodia and operate synergistically with Ena to promote filopodial protrusion dependent on a functional SH3 domain. In analogous yet distinct ways to lamellipodin and IRSp53, we propose that transient TOCA-1 clusters recruit and promote Ena activity to orchestrate filopodial protrusion. Copy rights belong to original authors. Visit the link for more info Podcast created by Paper Player, LLC

On this episode, we listen to "Stranger Things“ by Sh3, a singer-songwriter, producer, and music therapist based out of Toronto. Read the transcript with lyrics HERE! (https://docs.google.com/document/d/1HEvW0sv6yCvVZ6XOH8pgDik9PifdBJ4V/edit?usp=sharing&ouid=112605087850229851840&rtpof=true&sd=true) Check out more from Sh3: http://www.sh3official.com http://instagram.com/sh3official https://www.facebook.com/sh3official/ https://twitter.com/sh3official Other shoutouts include: https://researchcentres.wlu.ca/institute-for-music-therapy-research/index.html You can support this podcast as well by contributing to our Patreon (https://www.patreon.com/clinicalbopulations)and get bloopers, early releases, and more! Also, let everyone know you're a bophead by grabbing some swag from the Bop Shop (https://www.clinicalbopulations.threadless.com)! Share this episode from our Facebook page (https://www.facebook.com/ClinicalBOPulations) to help get the word out. ALSO, if you or someone you know is a songwriter and would like to be featured on this podcast, send us a message on our facebook page! These views do not represent AMTA or CBMT.

The National Treasury has proposed an increase in debt ceiling from the current Sh9 trillion to Sh10 trillion in order to enable the Government to borrow more to finance the Sh3.33 trillion budget for the 2022/23 financial year. Treasury CS Ukur Yattani has urged the Members of Parliament to amend the Public Finance Management Regulations, 2015, to increase the limit. The National Treasury had proposed that the debt limit be expressed in absolute figures rather than a percentage of GDP arguing that it's consistent with the constitution on openness, accountability, and clear fiscal reporting.

Podcast du 3 Mars 2022 mixé par Markus White en mode ( 1001tracklists ) Playlist INTRO => Disclosure, Zedd – You’ve Got To Let Go If You Want To Be Plastik Funk x Dario Trapani & Ivan Cappello x Sh3 – Sweet Harmony (Plastik Funk Club Mix)

Silent Hill: Secuelas: “Silent Hill: Revelation” (2012). Presupuesto: $50 M USD. Recaudación: $100 M USD. Año: 2006. Director: Christophe Gans. Actores: Radha Mitchell (Rose DaSilva), Sean Bean (Christopher DaSilva), Laurie Holden (Cybill Bennet) y Jodelle Ferland (Alessa Guillespie). Cronología:No hay que olvidar que para el 2006, cuando salió la película, ya existía el videojuego original del 99, también SH2 de 2001 y SH3 del 2003. Es decir, había más contexto en cuanto a la historia, personajes y sobre el pueblo. Esto tendría un impacto en la primera adaptación cinematográfica.Reparto: Radha Mitchell (Rose DaSilva): esta actriz no es muy popular, la recuerdo en el remake de George A. Romero “The Crazies”. Sean Bean (Christopher DaSilva): Actor de gran trayectoria y hasta donde se dice, todos sus personajes mueren. Tal vez lo recordemos más como Boromir en “TLOTR” y Ned Stark en “GOT”. Laurie Holden (Cybil Bennet): recordada por su trabajo en la serie “X-Files” y después en “The Walking Dead”. ¿De qué trata la película?El matrimonio DaSilva empieza a preocuparse debido a que su hija adoptada, Sharon (Alessa), sufre de pesadillas y sonambulismo, donde a menudo pronuncia las palabras “Silent Hill”, sin recordar nada al despertar.Rose investiga un poco sobre ese pueblo y decide llevar a su hija con el propósito de ayudarla a recordar sobre su vida antes de ser adoptada. Al llegar a Silent Hill, descubre un sitio cubierto de cenizas y neblina, sufre un aparatoso accidente y Sharon desaparece. Rose se adentrará hasta las entrañas del lugar para localizar a su hija, sin embargo, encontrará un terrible secreto.Antecedentes:¿Qué tanto se acerca la adaptación al juego? De entrada, en el juego es el esposo, Harry, quien se dirige a Silent Hill con su hija Cheryl para tomar unas vacaciones. Al entrar al pueblo, una niña se atraviesa haciendo que, de un volantazo, el hombre pierda el control del vehículo y queda inconsciente por el impacto. Al despertar, Cheryl no está y va a buscarla.Toda esta introducción es casi igual al juego en la película. Con la diferencia de que, en lugar de Harry, tenemos a Rose y el nombre de la hija adoptiva es Cheryl en lugar de Sharon.Además, contamos con el pueblo lleno de niebla y ceniza, en la película se explica que esto se debe al carbón ardiente bajo la ciudad. Sabemos que Rose escapaba de la policía, para llegar al pueblo. En ambas propuestas, logran el encuentro entre Cybil y Rose.¿Qué es lo que ocasiona que el pueblo esté lleno de neblina?Igual se preserva bastante bien este hecho, el horror detrás de la historia, muy crudo. En ambos casos, Alessa sufrió quemaduras fatales debido a un ritual que traería al dios del culto al que Dahlia lideraba. Como muestran en la película, Alessa es inmolada a sus siete años mediante un sacrificio horrible y lento.En su desesperación, la joven utiliza una proyección astral para separarse en dos versiones: la que está en sufrimiento y la feliz. Esto interfiere con el ritual porque, sí, logran poner la semilla del embrión maléfico en Alessa, pero no puede nacer porque su alma está dividida.Las heridas fatales de Alessa son sanadas por medio de un hechizo que la mantiene con vida. Dahlia quiere que su contraparte, Cheryl (en la película Sharon) regrese a Silent Hill para que se unan y pueda nacer la deidad prometida. Sin embargo, mantiene escondida a su hija en el sótano del hospital, a cargo de una enfermera. El médico –cultista– le administra alucinógenos y Dahlia la hace sufrir para que atraiga a Cheryl. ¿Cómo? Quiere intensificar el deseo de cometer un suicidio, pero en su estado, no puede hacerlo.En la película vemos a Dahlia, la madre vagabunda, aislada y viviendo en remordimiento por entregar a su hija. Sin embargo, en el juego, Dahlia era la líder del culto. De igual forma, la hija de Dahlia lleva el nombre de Alessa, la niña demonio que ha puesto la maldición sobre Silent Hill.La parte de Alessa que está enojada quiere venganza y se encuentra en continuo sufrimiento y alucinaciones.La enfermera que aparece en la película participa en el juego. Lisa, quien estaba a cargo de Alessa mientras era torturada y drogada, empieza a sangrar por los ojos, ya que no puede soportar verla.En el juego, Harry salva a Cybill (opcional) de morir y después de derrotar a la deidad reencarnada, huyen juntos.Es bien sabido que, según las decisiones del jugador, hay diferentes finales.En el caso de la película, Cybill termina inmolada también, quemada como bruja hasta morir.Derrotada la deidad, con la última energía de Alessa, reencarna un bebé, el cual Harry se lleva de regreso a su casa.En la película, Rose salva a Sharon de ser ejecutada. No existe la deidad como tal, sino la líder del culto que vive en el limbo sin aceptar que ellos son los pecadores. Cuando Alessa quiere vengarse de ellos, no puede porque se resguardan en la iglesia. Por eso guía a Rose con el propósito de que entre y por fin pueda hacerlos pagar.Al final, se entiende que Rose regresa a su casa con Sharon, sin embargo, se quedó en el Otro Mundo, ese limbo extraño.Mitología:Previo a la colonización de USA, el sitio se llamaba “El lugar del Silencio” o “Espíritus silenciados”. La leyenda dice que un espíritu no es solo de almas vivas, sino también rocas, agua, etc. El lugar no era malo por naturaleza, pero debido a las cosas ocurridas, cambió.El pueblo manifiesta los pensamientos más oscuros de las personas que están ahí.La conquista expulsa a los nativos, los nuevos habitantes le cambian el nombre. Una epidemia arrasa con ellos y los pocos sobrevivientes huyen. Más adelante construyen una prisión y un hospital debido a otra epidemia. La prisión cierra, se descubre la mina de carbón, entra en operación y la zona crece económicamente.Durante la guerra civil americana se construye otra prisión. Gente comienza a desaparecer.La prisión cierra y se vuelve un lugar turístico. Más gente muere, incluyendo gobernadores.Los cultistas son los culpables de las desapariciones.Debido a tanta corrupción en ese espacio sagrado y espiritual, es que el poder de esa tierra comenzó a reaccionar con más fuerza hacia sus ocupantes. Cada vez que alguien la toca, se expresaría lo que tuviera reprimido en lo más profundo de su ser.La neblina y el otro mundo:Es una delgada línea entre la realidad y los sueños.Los desarrolladores del juego explican estos cambios entre “el lado correcto” y “el lado inverso”. Ponen de ejemplo que, cuando uno duerme, puede estar en la fase de “sueño ligero” y “sueño REM (rapid eye movement)” que es cuando estamos soñando. De la misma forma actúa Silent Hill, hay momentos en la zona ligera, con la neblina y algo de luz... Pero al momento de alcanzar la zona REM, ahí nos adentramos a la peor pesadilla, junto a la oscuridad. Así, el ciclo se repite.Según los desarrolladores, ninguno de estos espacios es la realidad. La neblina representa los pensamientos que tiene y cómo los espíritus se aparecen en ellos. Conforme empiezas la espiral descendiente a las angustias y represiones, caes en el lado inverso y las manifestaciones se vuelven horribles.El mundo inverso:Según qué tan corrupto es su espíritu, será el lado inverso. ¿Por qué se llama así? En teoría es porque toma algo que conoces, algo que existe y lo transforma en su polo opuesto, en su lado más terrible.Dios (teoría de Max Derret):El dios al que La Orden (el culto) hace referencia, es muy probable que sea Baphomet –dios de lo absoluto–, se le conoce así porque es todo: tiene cara de cabra, cuerpo humano, tiene partes femeninas y masculinas, representa la luz y la oscuridad, tiene escamas y alas.Por otro lado, Carl Jung en su libro “Aion” dice que todos los humanos quieren convertirse en cosas mejores. Le llamó a la cumbre de este proceso de mejora como “Sí-mismo” o “The Self”. Este es el ideal máximo, equivalente a Dios.En varias religiones hay representaciones de Dios que alcanzan ese estado al llegar a un balance último entre lo mejor y peor de ellos. Por ejemplo, los cristianos quieren llegar a ser como Jesús, quien tuvo que vivir un infierno, ser crucificado y asesinado para resucitar como Dios, en su nivel más poderoso. Al lograr esto, se vuelve un todo: fue material y espiritual, fue malo y bueno, fue único (Jesús), pero universal porque es todo lo que existe, fue temporal como humano, pero también es eterno.Así, en “Silent Hill” vemos ese concepto en la deidad que quieren revivir y lo que se manifiesta en el pueblo. Está basada en el absoluto. El absoluto puede tomar varias formas según quién lo perciba. Por otro lado, La Orden, como culto está dispuesta a recorrer el camino del sufrimiento, sacrificios y demás, a cambio de llegar a un paraíso libre de sufrimiento.¿Cuál fue la contribución de la película al cine de horror?Las adaptaciones de videojuegos a películas por lo general no tienen buenos resultados, pero con “Silent Hill” se hizo un excelente trabajo.Basada en el primer título del videojuego del mismo nombre, nos presenta un gran tributo a la historia y personajes. Para el año del estreno ya contaban con cuatro títulos publicados.Tuvo buena recepción, pero tal vez se esperaba más por el potencial del universo de los videojuegos y por lo popular que estos son.Aunque mantiene la base de la historia, poco a poco la película se va alejando de Harry Mason. Inclusive toma elementos de otros títulos de la franquicia como las enfermeras y Pyramid Head del “Silent Hill 2” o la música de “Silent Hill 3”. Tal vez una estrategia para atraer a los fans.¿Por qué incluir a Pyramid Head?Pyramid head es un personaje icónico de “Silent Hill” y presenta una simbología importante: es la encarnación de la culpa y la ira.Es evidente que el personaje sale en “Silent Hill 2” por primera vez y que, muchos fans se enojaron porque no tenía nada que ver en la primera parte. Pero, si lo vemos desde un punto de vista simbólico, más allá de ser fan service e inspirar un gran miedo, representa todos los pensamientos oscuros que tenemos y que reprimimos.Como referencia, en “SH2”, el protagonista vive con una culpa terrible por haber asesinado a su esposa. No solo eso, previo al acto, lo acosan sentimientos de desesperación, enojo o represión sexual.Cuando vemos a Pyramid head, en varias ocasiones está realizando actos sexualizados y físicamente es un carnicero.En la película, la aparición de Pyramid head representaría aquella culpa de los actos horrendos realizados a Alessa y es el verdugo que va a castigar al pueblo. Actúa como protector.Se dice que también representa la figura paterna de Alessa. De cierta forma, en la película, debido a que Alessa nació del pecado, pues Dahlia era madre soltera, el culto decidió castigarla. Esto no hubiera sucedido si Alessa hubiera nacido de un matrimonio típico.Producción:Christopher Gans (“Brotherhood Of The Wolfes”) intentó por casi cinco años obtener los derechos de Konami para filmar una película de “Silent Hill”. Tanto Konami Japan y Team Silent, en ese entonces equipo de desarrollo de los videojuegos, se involucraron en la producción del filme.El escritor Roger Avary explicó que cuando su padre era niño, un ingeniero de minas solía contarle historias sobre el pueblo de Centralia, en Pensilvania, EE. UU., donde los depósitos de carbón de una mina local se incendiaron, lanzando gases tóxicos que obligaron a los habitantes a evacuarlo indefinidamente. Esta historia sirvió como base para “Silent Hill” en la película.La producción también contrató al compositor de la música de los videojuegos, Akira Yamaoka, y eso le da una mayor atracción, sin duda te transmite la sensación de estar jugando algún título de la saga.Gans pensó en hacer la película un universo de mujeres. La inclusión del esposo y el detective fueron elementos que la productora les hizo introducir.Al hacer el personaje principal mujer, Rose, considera que la película tiene una dirección clara: es un matriarcado, las mujeres están a cargo de toda decisión relevante y existe hermandad entre ellas, pueden sentir simpatía a través del hecho de ser madres, explorar desde la concepción divina. Lo vemos en la religión cristiana, pero en la historia se aborda como una deidad maligna, además de la fuerte simbología que existe respecto a la caza de brujas. Son concepciones con las cuales la audiencia está familiarizada.Akira Yamaoka menciona que el juego de “Silent Hill” se basa en todos los miedos y ansiedades reprimidas que tenemos. Cada persona sufre de manera diferente. Esas figuras deformadas representan dichos aspectos.Los efectos especiales son muy buenos, pero, además, el director buscó en la medida de lo posible que las criaturas humanoides fueran como esculturas, evitando el uso de CGI. Todas son actores y realzan la película, inspiran mayor miedo debido al impacto visual y por lo viscerales que son.Curiosidades:El director Gans, durante las grabaciones, tenía una TV con un PS2 y jugaba “Silent Hill” para que los actores y cinematógrafos pudieran ver lo que quería emular en algunos ángulos y movimientos.La película no cuenta con el elemento “JumpScare”. Se centra en la atmosfera y los sonidos, tal cual lo hacen en el videojuego.Créditos:Radio Horror es producido por Caro Arriaga y Rael Aguilar.Edición por Matías Beltrando desde Destek Soporte.Música:Closing Theme Hounds of Love por Dan Luscombe (Intro), Insiders por Joe Crotty (Intro), Patchwork por Patchworker f.k.a. [friendzoned] (Spoilers) y Nightlong por FSM Team (Outro).★ Support this podcast on Patreon ★

Jesus feeds 5,000 men--plus women and children with one little boy's lunch. (Luke 9:10-17) SH3 #kids, #christiankids, #biblelessonsforkids, #storiesforkids, #storiesforchristiankids, #bedtimstoriesforkids, #fishbytes4kids, #roncarriewebb, #salvation, #childofGod, #biblestoriesforkids, #jesus, #jesusfeeds5000, #5loavesand2fish, #miraclesofjesus, #littleboyslunch

Jesus feeds 5,000 men--plus women and children with one little boy's lunch. (Luke 9:10-17) SH3

Link to bioRxiv paper: http://biorxiv.org/cgi/content/short/2020.11.05.369645v1?rss=1 Authors: Aldehaiman, A., Momin, A. A., Restouin, A., Wang, L., Shi, X., Aljedani, S., Opi, S., Lugari, A., Hameed, U. F. S., Ponchon, L., Morelli, X., Huang, M., Dumas, C., Collette, Y., Arold, S. T. Abstract: The Nef protein of human and simian immunodeficiency viruses (HIV and SIV, respectively) boosts viral pathogenicity through its interactions with host cell proteins. Nef has a folded core domain and large flexible regions, each carrying several protein interaction sites. By combining the polyvalency intrinsic to unstructured regions with the binding selectivity and strength of a 3D folded domain, Nef can bind to many different host cell proteins, perturbing their cellular functions. For example, the combination of a linear proline-rich motif and a hydrophobic core domain surface allows Nef to increase affinity and selectivity for particular Src family SH3 domains. Here we investigated whether the interplay between Nefs flexible regions and its core domain can allosterically influence ligand selection. We found that the flexible regions can bind back to the core domain in different ways, producing distinct conformational states that alter the SH3 domain selectivity and availability of Nefs functional motifs. The resulting cross-talk might help synergising certain subsets of ligands while excluding others, promoting functionally coherent Nef-bound protein ensembles. Further, we combined proteomic and bioinformatic analyses to identify human proteins that select SH3 domains in the same way as does Nef. We found that only 2-3% of clones from a whole human fetal library displayed a Nef-like SH3 selectivity. However, in most cases this selectivity appears to be achieved by a canonical linear interaction rather than a Nef-like tertiary interaction. This analysis suggests that Nefs SH3 recognition surface has no (or marginally few) cellular counterparts, validating the Nef tertiary binding surface as a promising unique drug target. Copy rights belong to original authors. Visit the link for more info

Link to bioRxiv paper: http://biorxiv.org/cgi/content/short/2020.09.09.290122v1?rss=1 Authors: Pinet, L., Wang, Y., Deville, C., Lescop, E., Badache, A., Bontems, F., Morellet, N., Durand, D., Guerlesquin, F., Assrir, N., van Heijenoort, C. Abstract: ErbB2 (or HER2) is a receptor tyrosine kinase overexpressed in some breast cancers, associated with poor prognosis. Treatments targeting the receptor extracellular and kinase domains have greatly improved disease outcome in the last twenty years. In parallel, the structures of these domains have been described, enabling better mechanistic understanding of the receptor function and targeted inhibition. However, ErbB2 disordered C-terminal cytoplasmic tail (CtErbB2) remains very poorly characterized in terms of structure, dynamics and detailed functional mechanism. Yet, it is where signal transduction is triggered, via phosphorylation of tyrosine residues, and carried out, via interaction with adaptor proteins. Here we report the first description of ErbB2 disordered tail at atomic resolution, using NMR and SAXS. We show that although no part of CtErbB2 has any stable secondary or tertiary structure, it has around 20% propensity for a N-terminal helix that is suspected to interact with the kinase domain, and many PPII stretches distributed all along the sequence, forming potential SH3 and WW domains binding sites. Moreover, we identified a long-range transient contact involving CtErbB2 termini. These characteristics suggest new potential mechanisms of auto-regulation and protein-protein interaction. Copy rights belong to original authors. Visit the link for more info

Link to bioRxiv paper: http://biorxiv.org/cgi/content/short/2020.09.04.282855v1?rss=1 Authors: Small, C., Martinez-Marmol, R., Wallis, T., Gormal, R., Götz, J., Meunier, F. Abstract: Fyn is a Src kinase that controls critical signalling cascades and its postsynaptic enrichment underpins synaptotoxicity in Alzheimer's disease (AD) and frontotemporal dementia (FTLD-tau). Previously, we found that pathogenic FTLD tau mutant (P301L) expression promotes aberrant trapping of Fyn in nanoclusters within hippocampal dendrites via an unknown mechanism (Padmanabhan et al., 2019). Here, we imaged Fyn-mEos2 using single particle tracking photoactivated localization microscopy (sptPALM) to demonstrate that nanoclustering of Fyn in hippocampal dendrites is promoted by Fyn's open, primed conformation. Disrupting the auto-inhibitory, closed conformation of Fyn through phospho-inhibition, and perturbation of Fyn's SH3 domain increases, Fyn's nanoscale trapping. However, inhibition of Fyn's catalytic domain has no impact on its mobility. Tau-P301L promotes Fyn lateral trapping via Fyn opening and ensuing increased catalytic activation. Pathogenic tau may therefore drive synaptotoxicity by locking Fyn in an open, catalytically active conformation, leading to postsynaptic entrapment and aberrant signalling cascades. Copy rights belong to original authors. Visit the link for more info

Link to bioRxiv paper: http://biorxiv.org/cgi/content/short/2020.08.24.261826v1?rss=1 Authors: Mascotti, M. L., Juri Ayub, M., Fraaije, M. Abstract: The F420 deazaflavin cofactor is an intriguing molecule as it structurally resembles the canonical flavin cofactor, although biochemically behaves as a nicotinamide cofactor. Since its discovery, numerous enzymes relying on it have been described. The known deazaflavoproteins are taxonomically restricted to Archaea and Bacteria. The biochemistry of the deazaflavoenzymes is diverse and they exhibit some degree of structural variability as well. In this study a thorough sequence and structural homology evolutionary analysis was performed in order to generate an overarching classification of all known F420-dependent oxidoreductases. Five different superfamilies are described: Superfamily I, TIM-barrel F420-dependent enzymes; Superfamily II, Rossmann fold F420-dependent enzymes; Superfamily III, {beta}-roll F420-dependent enzymes; Superfamily IV, SH3 barrel F420-dependent enzymes and Superfamily V, 3 layer {beta}{beta} sandwich F420-dependent enzymes. This classification aims to be the framework for the identification, the description and the understanding the biochemistry of novel deazaflavoenzymes. Copy rights belong to original authors. Visit the link for more info

On Bill & Paul Face The Music, Music Night, Bill & Paul speak to SH3 and Alexis Taylor.

Link to bioRxiv paper: http://biorxiv.org/cgi/content/short/2020.07.30.229062v1?rss=1 Authors: Mompean, M., McAvan, B. S., Felix, S. S., Trevino, M., Oroz, J., Pantoja-Uceda, D., Cabrita, E. J., Doig, A. J., Laurents, D. V. Abstract: Many intrinsically disordered proteins contain Gly-rich regions which are generally assumed to be disordered. Such regions often form biomolecular condensates which play essential roles in organizing cellular processes. However, the bases of their formation and stability are still not completely understood. Considering NMR studies of the Gly-rich H. harveyi "snow flea" antifreeze protein, we recently proposed that Gly-rich sequences, such as the third "RGG" region of Fused in Sarcoma (FUS) protein, may adopt polyproline II helices whose association might stabilize condensates. Here, this hypothesis is tested with a polypeptide corresponding to the third RGG region of FUS. NMR spectroscopy and molecular dynamics simulations suggest that significant populations of polyproline II helix are present. These findings are corroborated in a model peptide Ac-RGGYGGRGGWGGRGGY-NH2, where a peak characteristic of polyproline II helix is observed using CD spectroscopy. Its intensity suggests a polyproline II population of 40%. This result is supported by data from FTIR and NMR spectroscopies. In the latter, NOE correlations are observed between the Tyr and Arg, and Arg and Trp side chain hydrogens, confirming that side chains spaced three residues apart are close in space. Taken together, the data are consistent with a polyproline II helix, which is bent to optimize interactions between guanidinium and aromatic moieties, in equilibrium with a statistical coil ensemble. In cells, the polyproline II population of these peptides could be augmented by binding profilin protein or SH3, WW or OCRE domains, association with RNA or assembly into polyproline II helical bundles. These results lend credence to the hypothesis that Gly-rich segments of disordered proteins may form polyproline II helices which help stabilize biomolecular condensates. Copy rights belong to original authors. Visit the link for more info

In this sixth episode I'm joined once again by Cj from Rely on Horror and a new guest, Kyle, and we discuss our thoughts on the Silent Hill Revelation 3D trailer. Be warned there is discussion of SH3 and major spoilers regarding that game.

The BCR/ABL1 fusion protein is found in virtually all cases chronic myeloid leukemia (CML) and a large proportion of acute lymphoblastic leukemia (ALL). The fact that the BCR/ABL1 fusion protein is crucial for the development of leukemia makes this fusion protein an attractive target for therapy development. We have developed a strategy for the in vivo detection of the BCR/ABL1 fusion protein, in which the presence of the BCR/ABL1 fusion protein is detected intracellularly and if the fusion protein is present an arbitrary action is initiated in the cell (e.g. mark the cells or selectively kill the cells). Our BCR/ABL1 detection strategy is based on protein-protein interactions. Two detection proteins are expressed in the cells: 1) protein A, a GAL4-DNA binding domain/BCR interacting protein fusion protein (GAL4DBD-BAP-1) and 2) protein B, a GAL4-activation domain/ABL interacting protein fusion protein (GAL4AD-CRKL). Only when BCR/ABL1 is present in the cell, do protein A, protein B, and BCR/ABL1 form a trimeric complex which activates the transcription of reporter genes under the control of GAL4-upstream activating sequence (UAS). A proof of principle for the strategy was implemented in the yeast system. We did not use full length BAP-1 or CRKL but only those portions of the proteins that directly interacted with BCR or ABL, respectively. We showed in the yeast two hybrid system, that the C-terminus of BAP-1(amino acids 617-879) binds to full length BCR. The site of interaction of CRKL and ABL was confirmed to be the N-terminal SH3 domain (SH3n) of CRKL as described in the literature. Yeast cells (strain CG1945) transformed with a protein A expressing plasmid (pGBT9-BAP), a protein B expressing plasmid (pGAD424-CRKLSH3n), and a BCR/ABL expressing plasmid (pES1/BCR-ABL) showed expression of the reporter genes HIS3 and LACZ. The expression of the HIS3 reporter gene was assayed by growth of the yeast cells on medium lacking histidine. The expression of the LACZ gene was verified by a beta-galactosidase filter assay. Yeast cells that were transformed with the pES1 plasmid without the BCR/ABL1 coding region did not show activation of the reporter genes. Several other negative controls demonstrated the specificity of the assay. Thus the method was able to clearly distinguish between BCR/ABL expressing cells and cells did not express BCR/ABL1. We then adapted this system for use in mammalian cells. The open-reading frames encoding the proteins A and B were recloned into mammalian expression vectors. The human embryonal kidney cell line HEK293 and the murine myeloid progenitor cell line 32D which had been stably transfected with a BCR/ABL expressing plasmid were tested. The firefly luciferase gene and the yellow fluorescent protein (eYFP) were used to evaluate the whole cell population and single cell, respectively. Unfortunately, the system failed to work in the mammalian cell lines tested. Even though the detection system did not work in mammalian cells, most likely due to the cytoplasmic localization of the BCR/ABL1 fusion protein, it should still be a viable strategy for the detection of leukemia-associated fusion protein, which localize to the nucleus (i.e AML-ETO). This strategy could be adapted for purging the bone marrow of leukemia patients using therapeutically more useful effector genes like suicide genes, which encode pro-drug converting enzymes (e.g. HSV thymidine kinase), or markers that can easily be assayed (e.g. YFP).

Die vorliegende Arbeit beschäftigt sich mit der funktionellen und molekularen Charakterisierung von humanen CD34- Zelllinien aus dem peripheren Blut (V54/1, V54/2) im Vergleich zu den aus dem Knochenmark etablierten Zelllinien (L87/4, L88/5). Die Klone V54/1 und V54/2 wurden aus dem peripheren Blut nach Stammzellmobilisierung und CD6 Depletion durch Zugabe eines Faktorengemisches aus IL-1b, IL-3, IL-6, IL-7, IL-8 und IL-11 erzeugt. L87/4 und L88/5 hingegen sind adhärente und wachstumsarretierte Stromazellen, die die Erhaltung und Differenzierung von hämatopoetischen Vorläuferzellen durch Mediatoren ermöglichen (Thalmeier et al. 2000). Das Ziel dieser Arbeit war die Untersuchung von Stammzelleigenschaften bei den Zelllinien L87/4, L88/5, V54/1 und V54/2. Dazu soll die Färbung mit den Farbstoffen Rhodamin 123 (Rh123) und Hoechst 33342 zeigen, ob Subpopulationen innerhalb der Klone mit unterschiedlichen Färbeeigenschaften, bestehen. Die biologische Bedeutung der beiden Farbstoffe liegt darin, dass Sie dazu geeignet sind frühe Stammzellen zu identifizieren. Als Substrat der P-Glykoproteinpumpe, die u.a. auf frühen Vorläuferzellen mit stark erhöhter Repopulationskapazität gefunden wird, werden diese Farbstoffe aus der Zelle gepumpt. Der Farbstoff-Efflux kommt durch die mdr-Gen-kodierte (multi-drug-resistance) und Kalzium-abhängige P-Glykoproteinpumpe zustande. Das P-Glykoprotein hat neben der Bedeutung in der Stammzellbiologie in der angewandten Medizin eine wichtige Funktion in der Resistenzentwicklung von Tumoren. Des weiteren wurden bei den Zelllinien stammzellrelevante Oberflächenantigene (CD10, CD34, CD14, CD105, SH3 und CD117) untersucht, um Unterschiede zwischen L87/4, L88/5 und den Klonen V54/1, V54/2 zu erkennen. Versuche zur Induktion der Differenzierung sollten Hinweise auf die Plastizität der Zelllinien geben. Experimente an den durch den Rh123-Efflux unterscheidbaren Subpopulationen der Zelllinie V54/2 dienen der Aufklärung von Unterschieden in Morphe, zellulären Transportfunktionen und Funktionseinheiten von Transkriptionsfaktor Netzwerken. Methodisch wurde für die Analyse der Epitope und der Färbungen mit Rh123 und Hoechst 33342 ein Durchflußzytometer verwendet. Die Analyse der Funktionseinheiten von Transkriptionsfaktor Netzwerken wurde mittels Reverse Transkriptase Polymerase Ketten Reaktion durchgeführt. Die Ergebnisse der Färbeexperimente zeigten, dass bei allen untersuchten Zelllinien durch eine unterschiedliche Anfärbbarkeit der Zellen mit dem Farbstoff Rh123 zwei Subpopulationen unterschieden werden können. Die jeweils größere Subpopulation der Zelllinien färbt sich mit Rh123 an und bleibt auch nach einer definierten Inkubationszeit, die den Rh123-Efflux ermöglichen soll, gefärbt. Sie wird Rh123high genannt. Die übrigen Zellen, die bei allen Zelllinien unter 10% der Gesamtpopulation betragen, sind in der Lage den Farbstoff aus der Zelle zu pumpen. Diese Subpopulation wird Rh123low genannt und ist mit Stammzelleigenschaften wie tausendfach erhöhter Repopulationsfähigkeit in NOD/SCID-Mäusen assoziiert. Es konnte also innerhalb der untersuchten monoklonalen Linien eine Rh123low Subpopulation identifiziert werden, die sich durch zahlreiche biologische Eigenschaften von der Gesamtpopulation unterscheidet. Da der Rh123 Efflux durch eine Kalzium-abhängige Pumpe zustande kommt, lässt sie sich durch den Kalziumantagonisten Verapamil hemmen. Eine Hemmung der Pumpe bewirkt, dass die Rh123low Zellen nicht mehr in der Lage sind Rh123 aus der Zelle zu pumpen, so dass sie nach einer definierten Inkubationszeit mit Rh123 gefärbt bleiben. Neben diesem funktionellen Beweis für die P-Glykoproteinpumpe konnte durch den strukturellen Nachweis der Pumpe mittels eines Antikörpers gegen P-Glykoprotein ein definitiver Beweis für das Vorhandensein der aktiven P-Glykoproteinpumpe bei der Rh123low Population erbracht werden. Mit dem anderen Farbstoff Hoechst 33342 können die jeweiligen Anteile der Zelllinien in den einzelnen Stadien des Zellzyklus nachgewiesen und zudem ein kleiner Anteil an Zellen bestimmt werden, der als „Side Population“ (SP-Zellen) definiert wird. Diesen SP-Zellen werden Eigenschaften von aktiven Stammzellen zugeschrieben. Hierbei besteht ein Unterschied zwischen den aus dem Knochenmark und den aus dem peripheren Blut etablierten Linien, da die Zellen aus dem peripheren Blut nicht nur ein anderes Zellzyklusmuster aufweisen, sondern auch einen höheren Anteil an SP-Zellen besitzen. Es wurden vergleichende Untersuchungen zwischen den Zelllinien und zwischen den Rh123high und Rh123low Subpopulationen innerhalb einer Zelllinie mit Antikörpern gegen die Epitope CD14, CD45, HLA-DR, CD10, CD117, CD105 und SH3 durchgeführt. Dabei waren CD14 und CD45 auf allen Zelllinien negativ, wobei alle Zelllinien eine positive Expression für den mesenchymalen Marker Endoglin (CD105) und für SH3 (CD73) zeigten. CD117 konnte nur auf den aus dem Knochenmark etablierten Zelllinien L87/4 und L88/5 nachgewiesen werden. CD34, ein charakteristischer Marker für hämatopoetische Vorläuferzellen, aber auch für Endothelzellen, konnte nur auf den Zellen der Rh123low Subpopulation nachgewiesen werden. Im Gegensatz dazu exprimieren die Rh123high Zellen kein CD34. Da es sich bei den Zelllinien um Klone handelt, ist der Unterschied in der Expression von CD34 zwischen der Rh123low und der Rh123high Population ein deutlicher Hinweis auf die Plastizität der Zelllinien und das Fließgleichgewicht zwischen Rh123low und Rh123high. Durch eine Zellsortierung der Zelllinie V54/2 wurde die Rh123low von der Rh123high Subpopulation getrennt, um sie dann bezüglich ihrer Morphologie, dem Wachstum in Methylzellulose und der Expression ausgewählter Funktionseinheiten von Transkriptionsfaktor Netzwerken zu untersuchen. Dabei erhärtete sich die Hypothese, dass es sich bei der Rh123low Subpopulation um aktivere Zellen mit einer gesteigerten Expression von erythroid/myeloischen und mesodermalen Eingaben (z.B. VEGF, BMP-4), Rezeptoren (z.B. tie-1), vernetzter Transkriptionsfaktoren (z.B. GATA, ETS) und letztendlich Ausgaben (z.B. PECAM) handelt. Diese fungieren in Netzwerken mit dem Ziel, stammzellrelevante Funktionen zu ermöglichen. Die Morphologie zeigte in den Zytozentrifugationspräparaten deutliche Unterschiede zwischen Zellen der Rh123low und der Rh123high Subpopulation. Die Rh123low Subpopulation besteht aus lymphoid-ähnlichen Zellen, was für Zellen mit Stammzellfunktion charakteristisch ist. Die Rh123high Subpopulation dagegen hat ein insgesamt größeres Zellvolumen und einen gebuchteten Kern mit perinukleärer Aufhellung. Untersuchungen des klonalen Wachstums in der Methylzellulose ergaben bei keiner der Subpopulationen eine wesentliche Koloniebildung. Durch die Inkubation der Zelllinie V54/2 mit dem Neurotropen Wachstumsfaktor (NGF) konnte eine morphologische Änderung in Richtung einer neuronalen/glialen Differenzierung nach 8-12 Stunden induziert werden. Der immunhistochemische Nachweis von Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) bestätigte die mesenchymale Potenz zumindest in Richtung einer glialen Differenzierung. Das unterschiedliche Expressionsmuster ausgewählter, für die Differenzierung notwendiger Zusammenspieler innerhalb von Transkriptionsfaktor Netzwerken innerhalb der Rh123high und der Rh123low Population bei V54/2 war ein weiterer Hinweis, dass es sich bei der Rh123low Subpopulation um aktive Vorläuferzellen mit möglicher Stammzellpotenz handelt. In der Rh123low Subpopulation wurde im Gegensatz zur Rh123high Population eine Expression von BMP4, GATA1, GATA3 nachgewiesen, die essentiell für die Hämatopoese und für eine mesenchymale Differenzierung ist. Die Faktoren für GATA2, GATA3, beta globin, Elf-1 und PECAM1 wurden in einem stärkeren Maß in der Rh123low als in der Rh123high Population exprimiert. BMP-Rez., Myb, sowie die Endothel-assoziierten Faktoren Tie-1 und VEGF waren in beiden Subpopulationen gleich stark vorhanden. Bei den wenigen Funktionseinheiten der größeren und Rh123high Population handelt es sich vor allem um angiogenetische Faktoren, was auf eine limitierte Differenzierungseigenschaft der Rh123high Subpopulation und die enge Beziehung zwischen Blut- und Endothelzellen („Hämangioblast“) hinweist. Ein Nachweis für die Plastizität der Stammzellen innerhalb der von uns etablierten Zelllinien wurde dadurch erbracht, dass die zellsortierten Subpopulationen Rh123low und Rh123high nach dem Sortierexperiment getrennt rekultiviert wurden, wobei das Wachstum der Rh123low Subpopulation deutlich langsamer war als das der Rh123high Subpopulation. Nach zwei Wochen wurden die zellsortierten Subpopulationen erneut einer Rh123 Färbung unterzogen, wobei sich wiederum das ursprüngliche Verhältnis zwischen den Rh123low und Rh123high Subpopulationen einstellte. So kann man aus der Transdifferenzierung der Zelllinien von Rh123low in Rh123high und umgekehrt die Plastizität der hier untersuchten adulten Stammzelllinien ableiten. Die Ergebnisse sollen zum grundlegenden Verständnis der Biologie adulter (nicht embryonaler) Stammzellen beitragen und damit die Möglichkeit schaffen, adulte Stammzellen bzw. deren Subpopulationen gezielt für einen reparativen Gewebe- und Organersatz zu verwenden. Dabei liefern sie die Basis für weitergehende Untersuchungen zum besseren Verständnis der physiologischen und regenerativen Vorgänge, z.B. auch bei Alterung oder bei gesteigerter Funktion. Darüber hinaus kann aufgrund der vorliegenden Ergebnisse durch weitere Untersuchungen möglicherweise besser verstanden werden, ob es gelingen kann das Potential adulter Stammzellen zur therapeutischen Gewebereparation, z.B. zur Verhinderung oder Verringerung einer Narbenbildung, zu nutzen.

Der eukaryontische Zellzyklus wird durch die Aktivität verschiedener Cyclinabhängiger Kinasen (CDKs) reguliert. Die zelluläre Menge des CDK-Inhibitorproteins p27Kip1 spielt eine entscheidende Rolle beim Übergang der Zelle von der G1- zur SPhase. Die Menge von p27Kip1 steigt während der G0- oder der G1-Phase an und nimmt zu Beginn der S-Phase rasch wieder ab. Die Bindung von p27Kip1 an die CDKKomplexe der G1-Phase inaktiviert diese und verhindert dadurch die Initiation der SPhase. Eine verminderte Menge von p27Kip1 am G1/S-Phaseübergang findet man dagegen häufig in verschiedenen Tumorgeweben. Die geringere zelluläre Menge des Inhibitors ist dabei mit einer hohen Patientensterblichkeit und einem aggressiven Verlauf der Erkrankung verbunden. Die zelluläre Aktivität und Menge von p27Kip1 wird entscheidend durch Proteine reguliert, die mit p27Kip1 interagieren. In dieser Arbeit wurden deshalb mit Hilfe von rekombinantem p27Kip1 Interaktionspartner des Inhibitors in HeLa-Zellextrakt identifiziert. Es konnte gezeigt werden, daß p27Kip1 an die CDK-Proteine und an Grb2 bindet. Grb2 ist ein Adapterprotein der Signaltransduktion. Die Interaktion zwischen p27Kip1 und Grb2 könnte damit, nach Stimulation der Zelle durch verschiedene Mitogene, die Signalweitergabe mit der Zellzyklusmaschinerie verbinden. Die zu dieser Interaktion notwendige Domäne in p27Kip1 konnte in weiteren Analysen auf eine acht Aminosäuren lange Prolin-reiche Region eingegrenzt werden. Auf der anderen Seite interagiert Grb2 vornehmlich über seine C-terminale SH3-Domäne mit p27Kip1. Die beiden mit p27Kip1 nah verwandten Inhibitorproteine p21Cip1 und p57Kip2 interagieren dagegen nicht mit Grb2. In einer erweiterten Analyse wurden 41 verschiedene rekombinante SH3-Domänen auf eine Interaktion mit p27Kip1 hin getestet. Es konnte gezeigt werden, daß p27Kip1 nur mit der C-terminalen SH3-Domäne von Grf40/Mona und der SH3-Domäne der Tyrosinkinase Lyn wechselwirkt. Die Interaktion der Tyrosinkinase Lyn in vivo führte zur Hypothese, daß p27Kip1 durch Lyn phosphoryliert werden könnte. Im zweiten Teil dieser Arbeit wurde deshalb die Tyrosinphosphorylierung von p27Kip1 untersucht. In Phosphoaminosäureanalysen mit metabolisch markierten Zellen konnte gezeigt werden, daß p27K i p 1 in vivo an Tyrosinresten phosphoryliert wird. Diese Zusammenfassung 13 Phosphorylierung konnte durch rekombinant hergestellte Tyrosinkinasen und verschiedene Tyrosin/Phenylalanin-Austausche in p27Kip1 auf Tyrosin 88 und 89 eingegrenzt werden. Nach Kristallstrukturdaten des trimeren Komplexes aus p27Kip1, CDK2 und Cyclin A kommt der Tyrosinrest 88 von p27Kip1 in der ATP-Bindetasche der Kinase zu liegen und blockiert diese. Es wurde deshalb untersucht, inwieweit eine Phosphorylierung von p27Kip1 an Tyrosin 88 oder 89 Einfluß auf die Aktivität des Inhibitors hat. Die Tyrosinphosphorylierung von p27Kip1 verhindert nicht die Bindung an den CDK-Komplex. Allerdings konnte mit in vitro-phosphoryliertem p27Kip1 gezeigt werden, daß eine Tyrosinphosphorylierung zu einer etwa 40%-igen Reduktion der Aktivität des Inhibitors führt. Diese Ergebnis konnte in vivo bestätigt werden. Interessanterweise verstärkt die Tyrosinphosphorylierung des Inhibitors die Phosphorylierung von p27Kip1 an Threonin 187 durch den gebundenen CDK-Komplex. Die Phosphorylierung von p27Kip1 an Threonin 187 ist in der Zelle ein initiales Signal zum Abbau von p27Kip1 durch das 26S-Proteasom. Das so markierte p27Kip1 wird von einem E3-Ligase-Komplex erkannt und ubiquitiniert. Es wurde deshalb untersucht, welchen Einfluß die Tyrosinphosphorylierung auf den Abbau von p27Kip1 besitzt. In Halbwertszeitbestimmungen mit einer SH3-bindedefizienten Form von p27Kip1 und einer Tyrosin/Phenylalanin-Austauschform von p27Kip1 konnte zeigten werden, daß beide Formen, im Vergleich zu unverändertem p27Kip1, eine höhere Stabilität aufweisen. Die Interaktion von p27Kip1 mit der Tyrosinkinase Lyn und die Inaktivierung des Inhibitors durch die Phosphorylierung von Tyrosinresten zeigt eine Möglichkeit auf wie p27Kip1, in Abhängigkeit von mitogenen Stimuli, reguliert werden kann. Die in dieser Arbeit gefundene Interaktion von Grb2, Grf40 und Lyn mit p27Kip1 verbindet damit die Signaltransduktion mit der Zellzykluskontrolle.